【摘 要】
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沙门菌依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用.为制备沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31100659、31272538）,国家重点基础研究发展计划[973计划（2012CB518801）]
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沙门菌依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用.为制备沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性基因片段,连接pET-28a构建打靶质粒,采用电击法将其转入含有pKD46a质粒的肠炎沙门菌中.经L-阿拉伯糖诱导同源重组后,鉴定阳性重组子,转化诱导产生重组酶FLp的pCP20质粒,从而删除氯霉素抗性基因,通过PCR方法鉴定缺失株,命名为SM6ASPI-1.连续培养鉴定表明缺失株具有良好的遗传稳定性.生长特性研究显示缺失株生长
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