【摘 要】
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研究了Pichiapastoris表达重组人复合α干扰素(cIFN)时诱导期温度对cIFN形成聚合体的影响.在5L罐上考察毕赤酵母在不同温度(30、25、20℃)下诱导时菌体生长和cIFN表达的差异,
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海贸基生物技术有限公司
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研究了Pichiapastoris表达重组人复合α干扰素(cIFN)时诱导期温度对cIFN形成聚合体的影响.在5L罐上考察毕赤酵母在不同温度(30、25、20℃)下诱导时菌体生长和cIFN表达的差异,发现毕赤酵母在20℃下菌体生长不受影响,总蛋白表达量有所降低,相当于30℃发酵时胞外总蛋白的67.8%.但是通过非还原性电泳、Native-PAGE及Western blotting分析发现较高温度(30℃)诱导表达时,分泌到胞外的cIFN容易形成聚合体,单体含量很少.诱导相控制温度为20℃时,明显降低了cIFN聚合体的形成,cIFN单体量为570mg/L,发酵上清液抗病毒活性为1.05×109IU/mL.与控制诱导相温度为30℃相比,cIFN单体量提高了7.2倍,发酵上清液中单位体积的cIFN抗病毒活性提高了38.7倍.
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