【摘 要】
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目的：研究pSecTag真核表达载体转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,选出该质粒转染鸡胚胎成纤维细胞的最佳转染条件,从而为研究目的基因在鸡胚胎成纤维细胞中成功表达奠定基础。
【机 构】
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山东省实验动物中心,济南250002泰山医学院,泰安271016
【出 处】
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华东地区第十届实验动物科学学术交流会
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目的：研究pSecTag真核表达载体转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,选出该质粒转染鸡胚胎成纤维细胞的最佳转染条件,从而为研究目的基因在鸡胚胎成纤维细胞中成功表达奠定基础。
方法：用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化的方法构建了pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化试验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,用Bradford 检测法检测正交优化不同组合细胞培养液中所表达分泌的增强绿色荧光蛋白的相对含量。
结果：成功构建pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,并选出该质粒转染鸡胚胎成纤维细胞的最佳转染条件,即脂质体加2μl、质粒加1.0μg。
结论：脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞。
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