【摘 要】
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为了探究磷脂酶patatin样域包含蛋白8(patatin-like phospholipase domain containing 8,PNPLA8)在水牛乳腺脂质代谢中的作用,试验根据GenBank中公布的奶牛PNPLA8基因序列(登
【机 构】
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中国农业科学院广西水牛研究所 ,农业农村部(广西)水牛遗传繁殖重点实验室 ,南宁530001隆安县动物疫病预防控制中心 ,南宁532700;
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为了探究磷脂酶patatin样域包含蛋白8(patatin-like phospholipase domain containing 8,PNPLA8)在水牛乳腺脂质代谢中的作用,试验根据GenBank中公布的奶牛PNPLA8基因序列(登录号:XM_005205444.4)设计引物,应用PCR扩增并克隆水牛PN PLA8基因编码区(CDS),应用生物信息学软件分析序列及蛋白质结构;抽提水牛不同组织及不同泌乳期乳腺组织RNA,利用实时荧光定量PCR检测PN PLA8基因在不同组织间和不同泌乳期的表达;利用不同浓度的催乳素处理水牛乳腺上皮细胞,通过定量检测催乳素对PNPLA8基因表达的影响.结果 显示,水牛PNPLA8基因CDS长2355 bp,编码784个氨基酸,与牦牛、山羊等PNPLA8基因具有较高的同源性;PN PLA8基因在所检测的水牛11个组织中有不同水平的表达,在肺脏和乳腺中表达量相对较高,在脂肪和肌肉组织中表达量较低;在整个泌乳期内PNPLA8基因的表达呈现“低—高—低”趋势;催乳素处理水牛乳腺上皮细胞结果显示,随着催乳素浓度升高,PN PLA8基因表达量逐渐下降.本研究成功克隆了水牛PN PLA8基因,并发现PNPLA8基因是参与乳腺泌乳的一个功能基因,为进一步研究PNPLA8基因在水牛乳腺中的功能奠定基础.
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