旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达

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应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选,对阳性克隆WN1序列进行生物信息学分析.结果表明,WN1 cDNA全长为474 bp,含有1个354 bp的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽由117个氨基酸残基组成,其相对分子质量理论推导值为13 200,等电点为4.25,N-末端的信号肽表明其可能为分泌性蛋白.GenBank数据库检索结果显示,此序列为一个新基因的全长cDNA.经PCR扩增WN1基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,重组质粒经鉴定后,转化大肠杆菌BL21 star(DE3)并诱导表达出相对分子质量为15 000的重组蛋白,与理论设计完全相符.
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