【摘 要】
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目的:探讨小干扰RNA (small interference RNA,siRNA) Piezo1沉默质粒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源外泌体对骨关节炎(osteoarthritis,OA)动物模型的作用.方法:选取雄性SD大鼠SPF级20只,月龄5.46～6.96(6.21±0.75)个月,体重385.76～428.66(407.21±21.45)g,提取大鼠的BMSCs,利用siRNA技术构建Piezo1的siRNA沉默质粒
【机 构】
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浙江大学附属金华医院金华市中心医院影像科,浙江金华321000;浙江大学附属金华医院金华市中心医院骨科,浙江金华321000;青岛大学附属医院科教部中心实验室,山东青岛266001
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目的:探讨小干扰RNA (small interference RNA,siRNA) Piezo1沉默质粒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源外泌体对骨关节炎(osteoarthritis,OA)动物模型的作用.方法:选取雄性SD大鼠SPF级20只,月龄5.46～6.96(6.21±0.75)个月,体重385.76～428.66(407.21±21.45)g,提取大鼠的BMSCs,利用siRNA技术构建Piezo1的siRNA沉默质粒,慢病毒转染BMSCs后,提取外泌体.在细胞层面,根据是否转染siRNA-Piezo1,将BMSCs分成空白质粒组和siRNA沉默质粒组,利用RT-PCR和Western blot法检测siRNA-Piezo1对BMSCs的成骨诱导能力.在动物模型层面,利用手术切除膝关节交叉韧带的方案制备OA动物模型,根据处理方案不同,将SD大鼠分为4组,空白对照组,模型组,BMSCs组和外泌体组.空白对照组大鼠不做处理;模型组大鼠切除交叉韧带后,构建OA动物模型;BMSCs组大鼠OA模型建成后,在CT引导下膝关节腔内注射BMSCs,细胞量为5×105个/ml,加载量2 ml,每周2次,持续4周;外泌体组大鼠OA模型建成后,加入siRNA-BMSCs来源的100 μg外泌体,每周2次,持续4周.采用苏木精-伊红(HE)染色和番红-固绿染色检测动物模型的软骨情况,并用改良Minkin评分和国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)评分量化处理.反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测软骨组织中多聚蛋白多糖(Aggrecan)Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)的mRNA相对表达水平.结果:慢病毒转染效率为(92.11±4.22)％.RT-PCR结果显示,空白质粒组Piezo1 mRNA的相对表达量为1.07±0.06,与siRNA沉默质粒组0.31±0.01比较,差异有统计学意义(t=2.907,P＜0.05).HE染色和番红-固绿染色结果显示,空白对照组大鼠膝关节软骨结构存在,软骨面光滑.模型组大鼠膝关节结构已经完全破坏,BMSCs组大鼠膝关节软骨结构欠清晰,外泌体组大鼠膝关节软骨下骨成分存在.膝关节HE染色的改良Minkin评分结果和番红固绿染色的OARSI评分结果比较差异有统计学意义(F=15.903,19.005;P＜0.05),外泌体组修复效果优于BMSCs组和模型组(P＜0.05).RT-PCR结果显示,BMSCs组中Aggrecan的mRNA相对表达量高于模型组(P＜0.05),外泌体组中Aggrecan的mRNA相对表达量高于BMSCs组和模型组(P＜0.05).BMSCs组中CollagenⅡ的mRNA相对表达量高于模型组(P＜0.05),外泌体组中CollagenⅡ的mRNA相对表达量高于BMSCs组和模型组(P＜O.05).结论:Piezo1 siRNA沉默载体可以促进BMSCs向软骨细胞分化,并且可以有效抑制OA的进展,延缓OA的病情.
其他文献
目的:观察KD-Ⅲ-M型膝关节损伤患者中内侧副韧带Ⅲ度损伤患者I期重建前后交叉韧带及内侧副韧带修补手术的疗效,比较关节镜下自体腘绳肌腱重建前交叉韧带并有限切开行内侧副韧带修补手术的基础上LARS人工韧带和自体对侧腘绳肌腱重建后交叉韧带的手术时间、手术并发症、住院费用及术后疗效等.方法:2016年3月至2019年1月符合该研究标准的患者36例,分为两组.A组20例,男17例,女3例,年龄(34.7±9.2)岁,选用自体腘绳肌重建前后交叉韧带,内侧副韧带原位修补;B组16例,男15例,女1例,年龄(36.8±
目的:探讨高海拔地区下肢开放性骨折的治疗方法及经验.方法:回顾性分析自2016年1月至2021年1月采用损伤控制骨科理念分阶段手术,重视创面处理,结合多种骨折固定方法治疗的62例下肢开放性骨折患者,男51例,女11例,年龄14～59 (37.2± 12.3)岁,病程7～59(23.7±15.5)d.所有患者伴有皮肤软组织损伤的开放性骨折,按Gustilo-Anderson分型,I型14例,Ⅱ型24例,ⅢA型14例,ⅢB型8例,ⅢC型2例.观察骨折修复及创面愈合情况,并采用Johner-Wruhs评价标准进
目的:比较改良经胫骨隧道(modified transtibial,MTT)技术与经前内侧入路(anteromedial portal,AM)技术进行单束前交叉韧带重建的骨隧道定位情况.方法:回顾性分析2017年1月至2020年9月进行单束前交叉韧带重建的78例患者的临床资料.其中39例采用MTT技术重建(MTT组),男25例,女14例,年龄(37.0±2.3)岁;39例采用AM技术重建(AM组),男27例,女12例,年龄(37.5±2.2)岁.术后1周内行膝关节CT平扫,运用Mimics软件测量并比较两
目的:探讨关节镜下采用免打结锚钉与Endobutton钛板联合固定后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折的临床疗效.方法:自2019年10月至2020年10月,采用关节镜下免打结锚钉联合Endobutton钛板治疗12例后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折患者,其中男9例,女3例;年龄23～58岁;受伤至手术时间2～9 d.其中MeyersⅡ型2例,MeyersⅢ型10例;合并半月板损伤2例,内侧副韧带部分损伤1例.术后评估骨折愈合情况和膝关节活动度,并采用Lysholm功能评分进行临床疗效评价.结果:所有患者获得12个月随访
患者,女,37岁,因“车祸致右膝关节疼痛肿胀伴功能受限5h”于2015年7月4日入院.患者入院前5h前车祸致右膝受伤,伤后出现右膝疼痛、肿胀及活动受限,于当地医院就诊,行右膝关节正侧位X线检查提示右胫骨平台骨折脱位(MooreⅡ型)(图1a,1b),当地医院不排除血管损伤而被紧急转诊到我院创伤中心.详细询问病史该患者受伤当时就坐于副驾驶席,其描述的受伤机制为典型仪表盘样损伤表现,在受伤同时从座位上被甩到车外(在撞击过程中没有系安全带).
目的:对比分析两种髋关节镜技术治疗股骨髋臼撞击征(femoroacetabular impingement,FAI)的临床疗效和并发症.方法:回顾性分析2016年6月至2019年6月采用髋关节镜手术治疗并获得随访的48例FAI患者.根据手术方式的不同分为两组,Inside-out组,由中央到外周;Outside-in组,由外周到中央.Inside-out组24例,男14例,女10例,年龄(39.8±7.6)岁;Outside-in组24例,男13例,女11例,年龄(39.5±9.1)岁.两组患者年龄、性别
目的:探讨外移股骨开髓点并设置个性化股骨外翻角能否改善合并股骨外弓的人工全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)患者下肢力线.方法:2016年3月至2018年10月,收治50例(55膝)合并股骨外弓拟行TKA的膝内翻畸形的骨关节炎患者.男10例,女40例;年龄63.1～80.5 (67.8±5.8)岁.单侧45例,双侧5例.55膝的骨关节炎分期均为Kellgren-Lawrence分级Ⅲ-Ⅳ级,病程2～10年.术前特种外科医院(Hospital for Special Su
目的:探讨应用经髌上入路交锁髓内钉技术治疗胫骨骨折的短期疗效.方法:2016年1月至2018年6月采用交锁髓内钉手术治疗80例胫骨骨折患者,根据手术入路不同分为观察组(经髌上入路)和对照组(经髌韧带入路).其中观察组40例,男28例,女12例,年龄28～67(46.70±10.34)岁;对照组40例,男30例,女10例,年龄31～69(49.38±10.74)岁.记录并比较分析两组患者手术时间,切口长度,术中X线机透视次数,术中失血量,骨折愈合时间,术后主动直腿抬高(straight leg raise,
目的:比较Endobutton带袢钛板与锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位的临床疗效及并发症.方法:回顾性2015年3月至2019年5月手术治疗的RockwoodⅢ-V型肩锁关节脱位患者48例,按照手术方法不同分为两组.其中23例采用Endobutton带袢钛板固定治疗(观察组),男15例,女8例;年龄23～59(36.2±8.1)岁;RockwoodⅢ型6例,Ⅳ型11例,V型6例.25例采用锁骨钩钢板治疗(对照组),男17例,女8例;年龄22～54(34.7±6.4)岁;Rock-woodⅢ型6例,Ⅳ型14例,
膝骨性关节炎相关的骨髓水肿样变(knee osteoarthritis-associated bone marrow edema-like lesions,KOA-BMLs)是一种常见的MRI影像学特征,主要表现为T2成像上软骨下骨的异常骨髓高信号.KOA-BMLs的形成可能与下肢力线以及软骨下骨灌注异常有关,而相关的组织病理学研究表明,这些损伤区域骨和骨髓的重建异常增加.在KOA患者中BMLs的大小可以在相对较短的时间内发生波动甚至消失,并且与疼痛、软骨下骨囊肿形成以及KOA病程进展密切相关.但是当前K