【摘 要】
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目的 构建人类mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法 采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)技术从含有mir-7-3基因的质粒pE
【机 构】
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扬州大学临床医学院神经外科,扬州大学临床医学院中心实验室,扬州大学临床医学院医务室
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目的 构建人类mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法 采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRNA VECTOR扩增目的 基因mir-7-3,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-RNAiVECTOR[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将Lenti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染人类胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和EGFP基因的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和人类胶质瘤细胞U251,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平.结果 Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FTV-CMV-EGFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的 基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地转导人U251.结论 成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;为进一步从分子水平探讨mir-7-3基因治疗胶质瘤奠定了基础.
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