论文部分内容阅读
【摘 要】目的：探讨表面活性剂Tween-20对免疫组化制片的影响。方法：使用加入 Tween-20的PBS缓冲液以及未加入Tween-20的PBS缓冲液分别对免疫组化切片进行冲洗，观察染色结果，并复习相关文献。结果：PBS-Tween-20缓冲液冲洗的免疫组化切片抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，非特异性染色减少。结论：应用PBS-Tween-20缓冲液冲洗免疫组化切片，不仅节省抗体的用量，节约医疗成本，并且使组织切片清洁得更干净，避免了非特异性染色的发生，值得推广。
【关键词】Tween-20；免疫组化；非特异性染色
表面活性剂Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物，亲水性强，为一种非离子型去污剂，能增加乳剂的稳定性。也可作某些药物的增溶剂。经过试验发现免疫组化过程中加入了Tween-20的PBS缓冲液冲洗切片，能够使切片更清洁，非特异性染色减少。本文对分别經过PBS-Tween-20缓冲液及PBS缓冲液冲洗的免疫组化切片进行对照，并将应用体会介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料
PBS磷酸盐缓冲液（0.01mol/L，PH7.2-7.4）、Tween-20、500ml容量瓶、
吸水纸，均购自福建迈新试剂有限公司。
1.2 方法
取500ml已配制好的PBS磷酸盐缓冲液置容量瓶中，加入250μl Tween-20，充分混匀，待用。现将经抗原修复后的组织切片分成3组（A、B、C）放入蒸馏水中备用。
A组：常规PBS磷酸盐缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。
B组：PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。
C组：专用免疫组化油笔划圈后，PBS-Tween-20缓冲液冲洗。
将3组处理过的切片进行同样的免疫组化后续操作。
2 结果
A组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏多，无需用吸水纸擦拭，同时还有个别组织边缘干燥，发生了边缘效应。
B组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，但每次滴加抗体前均需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。
C 组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。
3 讨论
本实验室免疫组化染色标本例数多，量大，半个工作日出片，由于一抗、二抗的孵育时间以及显色时间比较固定，这就要求在操作过程中尽量减少操作时间，并且尽可能地降低非特异性染色。A组虽然免疫组化油笔的使用节省了时间，但只能防止滴加的试剂不向四周流失，如果组织偏大就无法保证一次性将滴加的试剂完全覆盖整个组织，只有增加抗体用量将组织全部覆盖，抗体用量偏多，并且可能导致抗体覆盖不均，增加边缘效应、非特异性染色等。B组PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，玻片上含有Tween-20，用吸水纸擦拭后使用免疫组化油笔划的圈不能与玻片充分结合，再次冲洗后划痕被Tween-20溶解，不能保持完整性，需用吸水纸另外擦拭干水分，耽误时间。相比之下C组划圈后和玻片充分结合，再用PBS-Tween-20缓冲液冲洗，划痕不被溶解，将其倾斜在吸水纸上，划痕能保持完整性，不用吸水纸另外擦拭，节省不少时间。
Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸脂和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸脂的混合物。由于其分子中有较多的亲水性基团（聚氧乙烯基），故亲水性强，具有乳化、扩散、增溶、稳定等性能，是一种常用的非离子性去垢剂和表面活性剂，对人体无害、无刺激性，常用为医药品的乳化剂、扩散剂和稳定剂。用其多次冲洗能够均匀覆盖整张切片，如同在切片上增加了一层液体膜，不会使组织和切片空白区形成明显的分界线，在离组织边缘<2mm处划圈后，缓冲液能够在组织周围形成一个很清楚的界限，此时滴加的试剂能够佷均匀地分散在所用组织上，使整张切片染色均匀，避免重复滴加试剂，减少用量。由于缓冲液的表面张力作用，被封住的试剂不会向四周流散，且能够在组织上残留相对较多的缓冲液，更好地防止了干片的发生，避免造成边缘效应[1]。另外，由于Tween-20是去垢剂，也能够让组织切片清洁得更干净，避免了非特异性染色的发生[2]。Tween-20 和同类型的曲拉通X-100非离子型去污剂在乳化蛋白时，不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。曲拉通X-100是一种用途广泛的非离子表面活性剂，在温和的变性条件下用于恢复膜组分。在免疫组化中使用加入了曲拉通X-100的PBS磷酸盐缓冲液冲洗切片容易产生一些问题，比如破坏细胞膜增加染色强度，仅仅比较适应于乳腺和脑组织等。
该方法在本实验室已使用1年余，与不加Tween-20的PBS缓冲液做过多次对照实验，发现Tween-20对免疫组化染色结果无影响，可以放心使用。且PBS-Tween-20缓冲液配制方法简单，2000ml每包的PBS加入1ml的Tween-20，浓度不太高，价格也便宜，同时各种抗体的价格昂贵，这样节省了抗体的用量，节约医疗成本，值得推广。
参考文献：
[1] 周晓鸽.免疫组化染色过程中存在的问题及对策[J].诊断病理学杂志，2004，1（4），211-213.
[2] 何小艳，吴宁等.防止免疫组化切片干燥的新方法[J].诊断病理学杂志，2011，5（18），389.
【关键词】Tween-20；免疫组化；非特异性染色
表面活性剂Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物，亲水性强，为一种非离子型去污剂，能增加乳剂的稳定性。也可作某些药物的增溶剂。经过试验发现免疫组化过程中加入了Tween-20的PBS缓冲液冲洗切片，能够使切片更清洁，非特异性染色减少。本文对分别經过PBS-Tween-20缓冲液及PBS缓冲液冲洗的免疫组化切片进行对照，并将应用体会介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料
PBS磷酸盐缓冲液（0.01mol/L，PH7.2-7.4）、Tween-20、500ml容量瓶、
吸水纸，均购自福建迈新试剂有限公司。
1.2 方法
取500ml已配制好的PBS磷酸盐缓冲液置容量瓶中，加入250μl Tween-20，充分混匀，待用。现将经抗原修复后的组织切片分成3组（A、B、C）放入蒸馏水中备用。
A组：常规PBS磷酸盐缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。
B组：PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。
C组：专用免疫组化油笔划圈后，PBS-Tween-20缓冲液冲洗。
将3组处理过的切片进行同样的免疫组化后续操作。
2 结果
A组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏多，无需用吸水纸擦拭，同时还有个别组织边缘干燥，发生了边缘效应。
B组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，但每次滴加抗体前均需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。
C 组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。
3 讨论
本实验室免疫组化染色标本例数多，量大，半个工作日出片，由于一抗、二抗的孵育时间以及显色时间比较固定，这就要求在操作过程中尽量减少操作时间，并且尽可能地降低非特异性染色。A组虽然免疫组化油笔的使用节省了时间，但只能防止滴加的试剂不向四周流失，如果组织偏大就无法保证一次性将滴加的试剂完全覆盖整个组织，只有增加抗体用量将组织全部覆盖，抗体用量偏多，并且可能导致抗体覆盖不均，增加边缘效应、非特异性染色等。B组PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，玻片上含有Tween-20，用吸水纸擦拭后使用免疫组化油笔划的圈不能与玻片充分结合，再次冲洗后划痕被Tween-20溶解，不能保持完整性，需用吸水纸另外擦拭干水分，耽误时间。相比之下C组划圈后和玻片充分结合，再用PBS-Tween-20缓冲液冲洗，划痕不被溶解，将其倾斜在吸水纸上，划痕能保持完整性，不用吸水纸另外擦拭，节省不少时间。
Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸脂和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸脂的混合物。由于其分子中有较多的亲水性基团（聚氧乙烯基），故亲水性强，具有乳化、扩散、增溶、稳定等性能，是一种常用的非离子性去垢剂和表面活性剂，对人体无害、无刺激性，常用为医药品的乳化剂、扩散剂和稳定剂。用其多次冲洗能够均匀覆盖整张切片，如同在切片上增加了一层液体膜，不会使组织和切片空白区形成明显的分界线，在离组织边缘<2mm处划圈后，缓冲液能够在组织周围形成一个很清楚的界限，此时滴加的试剂能够佷均匀地分散在所用组织上，使整张切片染色均匀，避免重复滴加试剂，减少用量。由于缓冲液的表面张力作用，被封住的试剂不会向四周流散，且能够在组织上残留相对较多的缓冲液，更好地防止了干片的发生，避免造成边缘效应[1]。另外，由于Tween-20是去垢剂，也能够让组织切片清洁得更干净，避免了非特异性染色的发生[2]。Tween-20 和同类型的曲拉通X-100非离子型去污剂在乳化蛋白时，不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。曲拉通X-100是一种用途广泛的非离子表面活性剂，在温和的变性条件下用于恢复膜组分。在免疫组化中使用加入了曲拉通X-100的PBS磷酸盐缓冲液冲洗切片容易产生一些问题，比如破坏细胞膜增加染色强度，仅仅比较适应于乳腺和脑组织等。
该方法在本实验室已使用1年余，与不加Tween-20的PBS缓冲液做过多次对照实验，发现Tween-20对免疫组化染色结果无影响，可以放心使用。且PBS-Tween-20缓冲液配制方法简单，2000ml每包的PBS加入1ml的Tween-20，浓度不太高，价格也便宜，同时各种抗体的价格昂贵，这样节省了抗体的用量，节约医疗成本，值得推广。
参考文献：
[1] 周晓鸽.免疫组化染色过程中存在的问题及对策[J].诊断病理学杂志，2004，1（4），211-213.
[2] 何小艳，吴宁等.防止免疫组化切片干燥的新方法[J].诊断病理学杂志，2011，5（18），389.