【摘 要】
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目的:根据RNAi的原理自主构建一个真核表达的RNAi载体pcDU6.方法:从人的gDNA中克隆出U6promoter(-315～+1),将其与BglⅡ和ApaⅠ双酶切的pcDNA3.1(-)质粒大片段酶连,转化JM109大
【机 构】
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中南大学医学遗传学国家重点实验室,湖南,长沙,410078
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目的:根据RNAi的原理自主构建一个真核表达的RNAi载体pcDU6.方法:从人的gDNA中克隆出U6promoter(-315～+1),将其与BglⅡ和ApaⅠ双酶切的pcDNA3.1(-)质粒大片段酶连,转化JM109大肠杆菌,抽取阳性质粒测序证实,与GFP转染HT1080细胞;干扰肝癌细胞的AFP基因了解干扰效果.结果:pcDU6成功构建转染带有干扰AFP基因表达的RNAi质粒使肝癌细胞的能明显抑制AFP基因的表达(P＜0.01),转染质粒后Hep-3B细胞生长明显被抑制(P＜0.01).结论:pcDU6是一个有效的真核表达的RNAi干扰载体.
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