论文部分内容阅读
摘要 [目的]明确嘧肽·吗啉胍对马铃薯Y病毒坏死株系（PVYN）在不同茄科植物上的抑制作用。[方法]研究嘧肽·吗啉胍对PVYN在不同茄科作物上的防效，并采用分光光度计法测定植株体内PVYN病毒的浓度。[结果]嘧肽·吗啉胍对不同茄科寄主上的PVYN引起的病毒病害均具有较好的防治效果，可明显降低感病茄科作物体内PVYN的浓度。[结论]试验结果为嘧肽·吗啉胍的推广应用及由PVYN引起的病害防治提供了理论依据。
关键词 嘧肽·吗啉胍；PVYN；防效
中图分类号 S436.41 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）20-152-02
Abstract [Objective] The aim was to make sure the inhibition of Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride （CyMH） on infectivity of PVYN in solanaceous plants. [Method] Control effect of CyMH on infectivity of PVYN in solanaceous plants was studied， and the concentration of PVYN virus was determined by spectrophotometer. [Result] CyMH had a better effect on the infectivity of PVYN in all tested plants， and the concentration of PVYN was decreased after CyMH treatment. [Conclusion] The results provide theoretical basis for popularization and application of CyMH as well as the control of disease caused by PVYN virus.
Key words Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride； PVYN； Control effect
馬铃薯Y病毒属病毒是世界上植物病毒种类最多、对农业经济影响最严重的病毒之一[1-2]。近几年，PVYN在我国南北烟区呈上升趋势，每年都有一定程度的发生和危害，局部地区发病较重，对茄科作物产质量影响很大，是生产上较难防治的病害之一[3-5]。嘧肽·吗啉胍是沈阳农业大学烟草研究所针对烟草马铃薯Y病毒而研发的具有自主知识产权的新型、高效、低毒的复配型农药，对马铃薯Y病毒引起的脉坏死病有明显的预防和治疗效果。笔者研究了嘧肽·吗啉胍对PVYN在不同茄科植物如烟草、番茄和辣椒上的抑制作用，旨在为嘧肽·吗啉胍的药效评价及由PVYN引起的茄科作物病毒病防治提供借鉴。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试植物。在防虫温室中培育系统寄主普通烟K326、辣椒和番茄，并按照植株托盘育苗方法进行育苗操作和管理。
1.1.2 供试病毒。PVYN由沈阳农业大学烟草研究所分离提纯并繁殖保存于烟草品种K326上。
1.2 方法
1.2.1 接种液的制备。取经过复壮的携带PVYN的病叶与0.01 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.4）充分研磨，研磨后用双层纱布过滤，按照病叶质量和缓冲液体积比为1∶10的比例配制接种液，短期使用。
1.2.2 嘧肽·吗啉胍对PVYN在不同茄科作物上的防效。
取5～6叶期长势一致的烟草高感品种K326、辣椒及番茄，采用常规的摩擦接种法接种PVYN，设置于接种前24 h与接种后24 h喷洒嘧肽·吗啉胍700倍稀释液、接种当日用嘧肽·吗啉胍700倍稀释液与病毒等体积混合1 h和正常接种PVYN并喷洒清水对照4个处理，每个处理9株，3次重复。并设健康植株作为阴性对照，发病后调查病情指数，取平均值计算防效。
1.2.3 分光光度计法测定植株体内病毒浓度。
取5～6叶期的烟草高感品种K326、辣椒及番茄，处理同“1.2.2”，以喷清水为阳性对照，待阳性对照全部显症时，采取不同对照组发病烟草的上部叶片保存于装有液氮的保温瓶中，提纯PVYN病毒[6]，病毒浓度采用紫外分光光度计（NanodropND1000紫外可见分光光度计）测定[7]，比较PVYN病毒在260及280 nm波长处光吸收值之比和标准病毒蛋白与核酸含量的固定比值，用A260值来计算PVYN病毒的浓度。
1.2.4 病情分级标准与计算方法。PVYN在普通烟上的病情分级标准：
0级，全株无病或极轻微花叶；
1级，1/10～1/3的叶片表现轻微小叶脉坏死或出现点刻状条斑症状以及轻微变形，整株其他叶片无症状，植株无明显矮化；
2级，1/3～1/2的叶片表现点刻状条斑或脉坏死，病叶大部分小叶脉坏死，造成叶片较大面积的黄化枯死，植株矮化为正常株高的2/3以上；
3级，1/2～2/3的叶片表现较严重的脉坏死或2/3以上的叶片出现点刻状条斑坏死，造成叶片较大面积的枯死，少部分叶片脱落，或整株叶片开始变黄，或植株矮化为正常株的1/2～2/3；4级，全株叶片表现严重的脉坏死或叶片变形、萎缩，2/3左右的叶片萎蔫脱落。病株矮化为正常烟株的1/3～1/2，或整株凋萎。
PVYN在辣椒上的病情分级标准：
0级，无任何症状；
1级，心叶明脉，或接种叶枯斑；3级，少数叶片呈现花叶或茎部产生坏死点；5级，多数叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩或茎部产生坏死条斑； 7级，多数叶片畸形，植株矮化或茎条斑，叶脉产生系统坏死；
9级，植株严重矮化，停止生长或植株严重系统坏死，甚至死亡。
PVYN在番茄上的病情分级标准：
0级，无任何症状；
1级，心叶明脉，轻微花叶；
3级，心叶及中部叶片花叶；
5级，心叶及中部叶片花叶，少数病叶畸形皱缩或植株轻度矮化；
7级，重花叶，多数病叶畸形皱缩矮化或植株矮化；
9级，严重花叶，畸形或植株明显矮化，果实花斑。
病情指数=∑（相应的每级级数×该级病株数）/（最高级数×调查总株数）×100
防治效果=（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100%
病毒浓度（mg/ml）=A260×稀释倍数/E0.1%1 cm260 cm
式中，E0.1%1 cm260 cm为消光系数，即在波长为260 nm时，浓度为0.1%（1 mg/ml）的悬浮液，光程为1 cm时的光（光密度）吸收值。
标准PVYN的E0.1%1 cm260 cm=2.8，A260/A280=1.28。
2 结果与分析
2.1 嘧肽·吗啉胍对PVYN在普通烟上的防治效果
结果表明，嘧肽·吗啉胍对PVYN在高感品种K326上引起的病毒病害有较好的防治效果（表1）。接种PVYN前24 h和接种后24 h喷药，防治效果分别为60.39%和42.96%，对寄主有一定的保护和治疗作用，嘧肽·吗啉胍和PVYN混合接种的抑制率为67.78%。
2.2 嘧肽·吗啉胍对PVYN在辣椒上的防治效果
在PVYN侵染辣椒的试验中，嘧肽·吗啉胍对辣椒花叶病毒病害具有较好的防治效果（表2）。接种PVYN前24 h喷洒嘧肽·吗啉胍，其抑制率为64.09%；接种PVYN后24 h喷洒嘧肽·吗啉胍，其抑制率为42.72%；而嘧肽·吗啉胍和PVYN混合接种的抑制率为66.25%，表明该药剂对辣椒花叶病毒具有较强抑制作用的同时对辣椒还具有较好的保护作用。
2.3 嘧肽·吗啉胍对PVYN在番茄上的防治效果
番茄是田间 比较容易感染病毒的品种，在PVYN侵染番茄的试验中，嘧肽·吗啉胍对番茄花叶病毒病害具有较好的防治效果（表3）。嘧肽·吗啉胍对番茄的保护作用达50.84%，抑制作用达61.69%，治疗作用达41.93%。
2.4 分光光度计法测定嘧肽·吗啉胍对植株体内PVYN浓度的影响
使用分光光度计测定嘧肽·吗啉胍处理后的PVYN病毒浓度，其结果与上述症状结果表现一致（表4），说明嘧肽·吗啉胍可有效减轻PVYN感染烟草后的发病症状，同时使植株体内PVYN的浓度降低。接种前24 h喷施嘧肽·吗啉胍，抑制率为47.93%～54.90%；接种后24 h喷施嘧肽·吗啉胍，抑制率为32.50%～35.93%；与病毒混合1 h后再接种，抑制率高达62.61%～68.73%，效果最好。试验结果证实了嘧肽·吗啉胍能降低茄科植株体内病毒浓度，对病毒的复制和增殖有一定的抑制作用，从而控制PVYN对茄科作物的危害。
3 结论与讨论
采用3种不同处理方法研究嘧肽·吗啉胍对PVYN在茄科作物上的作用，结果表明，嘧肽·吗啉胍对PVYN侵染不同寄主植物有不同程度的抑制作用，其中药剂与病毒混合后再接种的防效最好，对烟草、辣椒、番茄的防效分别为67.78%、66.25%、61.69%。并采用紫外分光光度法对施用嘧肽·吗啉胍后植株体内PVYN病毒浓度变化进行检测，结果表明，施药后植株体内病毒浓度均明显低于清水对照，证明嘧肽·吗啉胍对植物体内PVYN的复制和增殖具有一定的抑制作用，降低了寄主植株體内病毒的浓度从而达到防治效果。
通过施用嘧肽·吗啉胍，可有效延缓PVYN病毒病害症状的出现，减轻病害发病程度，还可以通过体外钝化病毒粒子使其丧失侵染能力从而抑制PVYN的侵染，同时对寄主植物有一定的保护和治疗作用。由于药剂的处理方式不同，其防效也存在不同，说明嘧肽·吗啉胍抑制病毒的作用方式应该是多方面的，它既可以保护寄主植株，防止病毒的进入，又可以对寄主起到治疗作用，还可以在体外使病毒失去侵染能力，但是其作用方式和作用位点尚不清楚，还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 胡新喜，何长征，熊兴耀，等.马铃薯Y病毒研究进展[J].中国马铃薯，2009，23（5）：293-300.
[2] 孙剑萍，孙宏伟，虞艳芳.烟草马铃薯Y病毒发病的相关因素研究[J].中国烟草科学，2011，32（6）：80-84.
[3] 朱春玉，吴元华，赵秀香，等.嘧肽霉素对烟草花叶病毒在不同寄主上的防效研究[J].辽宁大学学报，2007，34（1）：50-53.
[4] 崔晓艳，魏太云，陈新，等.马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展[J].中国农业科学，2012，45（7）：1293-1302.
[5] 赵秀香，吴元华，杜春梅，等.新型农药嘧肽霉素防治番茄病毒病药效[J].农药，2004（12）：534-536.
[6] MATEVZ R，MAJA R，MAGDA T Z，et al.Fast purification of the filamentous potato virus Y using monolithic chromatographic supports[J].Journal of Chromatography A，2013，1272：33-40.
[7] 董丹，王春梅，吴元华.嘧肽霉素复配制剂06抗病毒机理初探[J].沈阳农业大学学报，2006，37（4）：593-596.
关键词 嘧肽·吗啉胍；PVYN；防效
中图分类号 S436.41 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）20-152-02
Abstract [Objective] The aim was to make sure the inhibition of Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride （CyMH） on infectivity of PVYN in solanaceous plants. [Method] Control effect of CyMH on infectivity of PVYN in solanaceous plants was studied， and the concentration of PVYN virus was determined by spectrophotometer. [Result] CyMH had a better effect on the infectivity of PVYN in all tested plants， and the concentration of PVYN was decreased after CyMH treatment. [Conclusion] The results provide theoretical basis for popularization and application of CyMH as well as the control of disease caused by PVYN virus.
Key words Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride； PVYN； Control effect
馬铃薯Y病毒属病毒是世界上植物病毒种类最多、对农业经济影响最严重的病毒之一[1-2]。近几年，PVYN在我国南北烟区呈上升趋势，每年都有一定程度的发生和危害，局部地区发病较重，对茄科作物产质量影响很大，是生产上较难防治的病害之一[3-5]。嘧肽·吗啉胍是沈阳农业大学烟草研究所针对烟草马铃薯Y病毒而研发的具有自主知识产权的新型、高效、低毒的复配型农药，对马铃薯Y病毒引起的脉坏死病有明显的预防和治疗效果。笔者研究了嘧肽·吗啉胍对PVYN在不同茄科植物如烟草、番茄和辣椒上的抑制作用，旨在为嘧肽·吗啉胍的药效评价及由PVYN引起的茄科作物病毒病防治提供借鉴。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试植物。在防虫温室中培育系统寄主普通烟K326、辣椒和番茄，并按照植株托盘育苗方法进行育苗操作和管理。
1.1.2 供试病毒。PVYN由沈阳农业大学烟草研究所分离提纯并繁殖保存于烟草品种K326上。
1.2 方法
1.2.1 接种液的制备。取经过复壮的携带PVYN的病叶与0.01 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.4）充分研磨，研磨后用双层纱布过滤，按照病叶质量和缓冲液体积比为1∶10的比例配制接种液，短期使用。
1.2.2 嘧肽·吗啉胍对PVYN在不同茄科作物上的防效。
取5～6叶期长势一致的烟草高感品种K326、辣椒及番茄，采用常规的摩擦接种法接种PVYN，设置于接种前24 h与接种后24 h喷洒嘧肽·吗啉胍700倍稀释液、接种当日用嘧肽·吗啉胍700倍稀释液与病毒等体积混合1 h和正常接种PVYN并喷洒清水对照4个处理，每个处理9株，3次重复。并设健康植株作为阴性对照，发病后调查病情指数，取平均值计算防效。
1.2.3 分光光度计法测定植株体内病毒浓度。
取5～6叶期的烟草高感品种K326、辣椒及番茄，处理同“1.2.2”，以喷清水为阳性对照，待阳性对照全部显症时，采取不同对照组发病烟草的上部叶片保存于装有液氮的保温瓶中，提纯PVYN病毒[6]，病毒浓度采用紫外分光光度计（NanodropND1000紫外可见分光光度计）测定[7]，比较PVYN病毒在260及280 nm波长处光吸收值之比和标准病毒蛋白与核酸含量的固定比值，用A260值来计算PVYN病毒的浓度。
1.2.4 病情分级标准与计算方法。PVYN在普通烟上的病情分级标准：
0级，全株无病或极轻微花叶；
1级，1/10～1/3的叶片表现轻微小叶脉坏死或出现点刻状条斑症状以及轻微变形，整株其他叶片无症状，植株无明显矮化；
2级，1/3～1/2的叶片表现点刻状条斑或脉坏死，病叶大部分小叶脉坏死，造成叶片较大面积的黄化枯死，植株矮化为正常株高的2/3以上；
3级，1/2～2/3的叶片表现较严重的脉坏死或2/3以上的叶片出现点刻状条斑坏死，造成叶片较大面积的枯死，少部分叶片脱落，或整株叶片开始变黄，或植株矮化为正常株的1/2～2/3；4级，全株叶片表现严重的脉坏死或叶片变形、萎缩，2/3左右的叶片萎蔫脱落。病株矮化为正常烟株的1/3～1/2，或整株凋萎。
PVYN在辣椒上的病情分级标准：
0级，无任何症状；
1级，心叶明脉，或接种叶枯斑；3级，少数叶片呈现花叶或茎部产生坏死点；5级，多数叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩或茎部产生坏死条斑； 7级，多数叶片畸形，植株矮化或茎条斑，叶脉产生系统坏死；
9级，植株严重矮化，停止生长或植株严重系统坏死，甚至死亡。
PVYN在番茄上的病情分级标准：
0级，无任何症状；
1级，心叶明脉，轻微花叶；
3级，心叶及中部叶片花叶；
5级，心叶及中部叶片花叶，少数病叶畸形皱缩或植株轻度矮化；
7级，重花叶，多数病叶畸形皱缩矮化或植株矮化；
9级，严重花叶，畸形或植株明显矮化，果实花斑。
病情指数=∑（相应的每级级数×该级病株数）/（最高级数×调查总株数）×100
防治效果=（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100%
病毒浓度（mg/ml）=A260×稀释倍数/E0.1%1 cm260 cm
式中，E0.1%1 cm260 cm为消光系数，即在波长为260 nm时，浓度为0.1%（1 mg/ml）的悬浮液，光程为1 cm时的光（光密度）吸收值。
标准PVYN的E0.1%1 cm260 cm=2.8，A260/A280=1.28。
2 结果与分析
2.1 嘧肽·吗啉胍对PVYN在普通烟上的防治效果
结果表明，嘧肽·吗啉胍对PVYN在高感品种K326上引起的病毒病害有较好的防治效果（表1）。接种PVYN前24 h和接种后24 h喷药，防治效果分别为60.39%和42.96%，对寄主有一定的保护和治疗作用，嘧肽·吗啉胍和PVYN混合接种的抑制率为67.78%。
2.2 嘧肽·吗啉胍对PVYN在辣椒上的防治效果
在PVYN侵染辣椒的试验中，嘧肽·吗啉胍对辣椒花叶病毒病害具有较好的防治效果（表2）。接种PVYN前24 h喷洒嘧肽·吗啉胍，其抑制率为64.09%；接种PVYN后24 h喷洒嘧肽·吗啉胍，其抑制率为42.72%；而嘧肽·吗啉胍和PVYN混合接种的抑制率为66.25%，表明该药剂对辣椒花叶病毒具有较强抑制作用的同时对辣椒还具有较好的保护作用。
2.3 嘧肽·吗啉胍对PVYN在番茄上的防治效果
番茄是田间 比较容易感染病毒的品种，在PVYN侵染番茄的试验中，嘧肽·吗啉胍对番茄花叶病毒病害具有较好的防治效果（表3）。嘧肽·吗啉胍对番茄的保护作用达50.84%，抑制作用达61.69%，治疗作用达41.93%。
2.4 分光光度计法测定嘧肽·吗啉胍对植株体内PVYN浓度的影响
使用分光光度计测定嘧肽·吗啉胍处理后的PVYN病毒浓度，其结果与上述症状结果表现一致（表4），说明嘧肽·吗啉胍可有效减轻PVYN感染烟草后的发病症状，同时使植株体内PVYN的浓度降低。接种前24 h喷施嘧肽·吗啉胍，抑制率为47.93%～54.90%；接种后24 h喷施嘧肽·吗啉胍，抑制率为32.50%～35.93%；与病毒混合1 h后再接种，抑制率高达62.61%～68.73%，效果最好。试验结果证实了嘧肽·吗啉胍能降低茄科植株体内病毒浓度，对病毒的复制和增殖有一定的抑制作用，从而控制PVYN对茄科作物的危害。
3 结论与讨论
采用3种不同处理方法研究嘧肽·吗啉胍对PVYN在茄科作物上的作用，结果表明，嘧肽·吗啉胍对PVYN侵染不同寄主植物有不同程度的抑制作用，其中药剂与病毒混合后再接种的防效最好，对烟草、辣椒、番茄的防效分别为67.78%、66.25%、61.69%。并采用紫外分光光度法对施用嘧肽·吗啉胍后植株体内PVYN病毒浓度变化进行检测，结果表明，施药后植株体内病毒浓度均明显低于清水对照，证明嘧肽·吗啉胍对植物体内PVYN的复制和增殖具有一定的抑制作用，降低了寄主植株體内病毒的浓度从而达到防治效果。
通过施用嘧肽·吗啉胍，可有效延缓PVYN病毒病害症状的出现，减轻病害发病程度，还可以通过体外钝化病毒粒子使其丧失侵染能力从而抑制PVYN的侵染，同时对寄主植物有一定的保护和治疗作用。由于药剂的处理方式不同，其防效也存在不同，说明嘧肽·吗啉胍抑制病毒的作用方式应该是多方面的，它既可以保护寄主植株，防止病毒的进入，又可以对寄主起到治疗作用，还可以在体外使病毒失去侵染能力，但是其作用方式和作用位点尚不清楚，还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 胡新喜，何长征，熊兴耀，等.马铃薯Y病毒研究进展[J].中国马铃薯，2009，23（5）：293-300.
[2] 孙剑萍，孙宏伟，虞艳芳.烟草马铃薯Y病毒发病的相关因素研究[J].中国烟草科学，2011，32（6）：80-84.
[3] 朱春玉，吴元华，赵秀香，等.嘧肽霉素对烟草花叶病毒在不同寄主上的防效研究[J].辽宁大学学报，2007，34（1）：50-53.
[4] 崔晓艳，魏太云，陈新，等.马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展[J].中国农业科学，2012，45（7）：1293-1302.
[5] 赵秀香，吴元华，杜春梅，等.新型农药嘧肽霉素防治番茄病毒病药效[J].农药，2004（12）：534-536.
[6] MATEVZ R，MAJA R，MAGDA T Z，et al.Fast purification of the filamentous potato virus Y using monolithic chromatographic supports[J].Journal of Chromatography A，2013，1272：33-40.
[7] 董丹，王春梅，吴元华.嘧肽霉素复配制剂06抗病毒机理初探[J].沈阳农业大学学报，2006，37（4）：593-596.