【摘 要】
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为了探索flhA基因在荧光假单胞菌7-14（Pf7-14）鞭毛合成的作用,以铜绿假单胞菌UCBPP-PA14的鞭毛蛋白F lhA（NC008463.1）为诱饵,在荧光假单胞菌Pf-5（NC004129）、Pf0-1（NC007492）和SBW 25
【机 构】
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南京农业大学植物保护学院农业部病虫监测与治理重点开放实验室,南京出入境检验检疫局,南京中健卫生实业有限公司
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为了探索flhA基因在荧光假单胞菌7-14（Pf7-14）鞭毛合成的作用,以铜绿假单胞菌UCBPP-PA14的鞭毛蛋白F lhA（NC008463.1）为诱饵,在荧光假单胞菌Pf-5（NC004129）、Pf0-1（NC007492）和SBW 25（NC012660）的全基因组中进行BLASTP比对分析,结果在Pf-5、Pf0-1和SBW 25的全基因组搜索到flhA的同系物,分别命名为flhAPf-5f、lhAPf0-1和flhASBW25。根据三者的核酸序列,设计简并引物flhA-F/flhA-R,以荧光假单胞菌7-14（Pf7-14）基因组DNA为模板进行PCR扩增,并对得到的片段测序比对,发现该片段2130 bp为一完整的开放阅读框,命名为flhAPf7-14。flhAPf7-14在氨基酸水平上与flhAPf-5和flhAPf0-1的同源性分别达到93%和94%。Southern杂交证明flhA在Pf7-14基因组中为单一拷贝。通过同源重组单交换的方式构建了Pf7-14flhA基因插入失活突变株,结果表明flhA突变体缺失了鞭毛装置并丧失了游动性,而互补菌株则恢复了鞭毛合成能力和游动能力。本研究为今后进一步研究Pf7-14鞭毛合成、菌体游动性与该菌定殖能力及生防能力的关系奠定基础。
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