论文部分内容阅读
[摘 要]目的：当归与川芎中阿魏酸含量测定所用色谱条件的整合及成本节约。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱Diamonsil C18 （250×4.6 mm，5 μm）：流动相为甲醇-水（33：67）；流速：1.0 mL·min-1；檢测波长321 nm，测定当归中阿魏酸的含量。结果：确定可以用甲醇替代乙腈来测定当归中的阿魏酸含量，使检验结果不受影响的前提下节约检验成本，提高工作效率。结论：用甲醇代替乙腈检验当归中阿魏酸的含量是可行的，可以节约检验成本及检验时间。
[关键词]当归；阿魏酸；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）29-0131-01
本实验通过利用高效液相色谱法在川芎的色谱条件下测定当归中阿魏酸的含量，把当归流动相中的有机相乙腈变换为价格相对便宜的甲醇，从而节约了检验成本，并可以使川芎与当归同时检验，节约时间和流动相成本。
1 仪器与试药
粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）；超声波清洗仪（KQ-300B，昆山市超声仪器有限公司，功率250W，频率33kHz）；Agilent-1260高效液相色谱仪（美国安捷伦有限责任公司），等。
当归药材取自本公司原料仓库；
阿魏酸对照品（批号：110733-200611）；由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯（河北四友卓越科技有限公司401792）；其余试剂为分析纯，水为纯净水。
2 对照品及供试品的制备
2.1 对照品的制备
精确称取阿魏酸对照品适量，分别用70%甲醇溶解，制成每1mL含阿魏酸12.0μg的溶液。
2.2 供试品的制备
取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上层清液滤过，取续滤液，即得。
3 方法与结果
3.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18（250×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（33：67）；流速：1.0mL·min-1；检测波长321nm；柱温：室温；进样量：5μL。理论塔板数按阿魏酸峰计算，应不低于6000。
3.2 线性关系考察
精确量取对照品溶液1mL，共四份，用70%甲醇分别稀释一定倍数，制成一系列不同浓度的对照溶液（6.45μg·min-1，12.90μg·min-1，21.50μg·min-1，28.67μg·min-1，35.84μg·min-1）依次注入液相色谱仪，测定峰面积，每份进针3次，取平均值。以溶液浓度与峰面积绘制标准曲线，并计算回归方程。阿魏酸线性方程与相关系数分别为：Y=267306X-58832，R2=0.9996。结果表明阿魏酸在6.45ug·min-1～35.84ug·min-1范圍内具有良好的线性关系。
3.3 精密度试验
吸取同一浓度的阿魏酸溶液（12.90ug·min-1），在上述色谱条件下，重复进样6次，进行精密度实验，RSD值为0.48%，精密度良好。
3.4 重复性试验
取供试品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，计算RSD值为0.52%。
3.5 稳定性试验
取供试品溶液，在上述色谱条件下，分别在2、4、8、16、24h测定，记录峰面积，每份进针3次，取平均值，计算RSD为0.37%。
3.6 回收率试验
精密称取已知含量的当归0.1g三份，分别精密加入一定量的对照品溶液，按照上述提取方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样，计算回收率。
3.7 测定结果
取上述供试品溶液及阿魏酸对照品溶液，注入高效色谱仪，典型HPLC图见附图1-图2，含量测定结果见表1。
4 不同HPLC色谱条件测定结果比较
取上述供试品溶液，按药典[1]色谱条件进高效液相，HPLC图见附图3-图4。
5 方法验证
取三个批号的当归药材分别在3.1项下及药典项下的色谱条件进HPLC，含量测定结果见表1。
6 讨论
本试验尝试过完全利用川芎流动相比例（甲醇-1%醋酸溶液=30：70）测定当归中阿魏酸含量，进行高效液相测定，但相比甲醇比例33%，阿魏酸保留时间较长（约33min），不利于高效率的检验；因此提高甲醇比例为33%，缩短保留时间，同时柱效基本不受影响。但是如果当归与川芎同时取样检验，也可以利用川芎流动相进行统一检验，既便于综合评价，又相对缩短工作时间，提高工作效率，并降低检验成本。
从附图1-图4可以看出，相对于药典方法，本实验色谱条件下，同样能够达到较好的分离效果，只是存在分析保留时间偏长的问题，有待于进一步的试验探索。另外，本实验方法验证仅采用了三个批次的当归，批次数目有限，还需要大量的验证工作。
本试验创新点在于流动相采用价格低廉的甲醇代替了价格较贵的乙腈，比较2010年版《中国药典》方法经济，实惠，并在必要时可以同时测定川芎和当归中阿魏酸的含量，利于质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2010：141.
[关键词]当归；阿魏酸；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）29-0131-01
本实验通过利用高效液相色谱法在川芎的色谱条件下测定当归中阿魏酸的含量，把当归流动相中的有机相乙腈变换为价格相对便宜的甲醇，从而节约了检验成本，并可以使川芎与当归同时检验，节约时间和流动相成本。
1 仪器与试药
粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）；超声波清洗仪（KQ-300B，昆山市超声仪器有限公司，功率250W，频率33kHz）；Agilent-1260高效液相色谱仪（美国安捷伦有限责任公司），等。
当归药材取自本公司原料仓库；
阿魏酸对照品（批号：110733-200611）；由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯（河北四友卓越科技有限公司401792）；其余试剂为分析纯，水为纯净水。
2 对照品及供试品的制备
2.1 对照品的制备
精确称取阿魏酸对照品适量，分别用70%甲醇溶解，制成每1mL含阿魏酸12.0μg的溶液。
2.2 供试品的制备
取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上层清液滤过，取续滤液，即得。
3 方法与结果
3.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18（250×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（33：67）；流速：1.0mL·min-1；检测波长321nm；柱温：室温；进样量：5μL。理论塔板数按阿魏酸峰计算，应不低于6000。
3.2 线性关系考察
精确量取对照品溶液1mL，共四份，用70%甲醇分别稀释一定倍数，制成一系列不同浓度的对照溶液（6.45μg·min-1，12.90μg·min-1，21.50μg·min-1，28.67μg·min-1，35.84μg·min-1）依次注入液相色谱仪，测定峰面积，每份进针3次，取平均值。以溶液浓度与峰面积绘制标准曲线，并计算回归方程。阿魏酸线性方程与相关系数分别为：Y=267306X-58832，R2=0.9996。结果表明阿魏酸在6.45ug·min-1～35.84ug·min-1范圍内具有良好的线性关系。
3.3 精密度试验
吸取同一浓度的阿魏酸溶液（12.90ug·min-1），在上述色谱条件下，重复进样6次，进行精密度实验，RSD值为0.48%，精密度良好。
3.4 重复性试验
取供试品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，计算RSD值为0.52%。
3.5 稳定性试验
取供试品溶液，在上述色谱条件下，分别在2、4、8、16、24h测定，记录峰面积，每份进针3次，取平均值，计算RSD为0.37%。
3.6 回收率试验
精密称取已知含量的当归0.1g三份，分别精密加入一定量的对照品溶液，按照上述提取方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样，计算回收率。
3.7 测定结果
取上述供试品溶液及阿魏酸对照品溶液，注入高效色谱仪，典型HPLC图见附图1-图2，含量测定结果见表1。
4 不同HPLC色谱条件测定结果比较
取上述供试品溶液，按药典[1]色谱条件进高效液相，HPLC图见附图3-图4。
5 方法验证
取三个批号的当归药材分别在3.1项下及药典项下的色谱条件进HPLC，含量测定结果见表1。
6 讨论
本试验尝试过完全利用川芎流动相比例（甲醇-1%醋酸溶液=30：70）测定当归中阿魏酸含量，进行高效液相测定，但相比甲醇比例33%，阿魏酸保留时间较长（约33min），不利于高效率的检验；因此提高甲醇比例为33%，缩短保留时间，同时柱效基本不受影响。但是如果当归与川芎同时取样检验，也可以利用川芎流动相进行统一检验，既便于综合评价，又相对缩短工作时间，提高工作效率，并降低检验成本。
从附图1-图4可以看出，相对于药典方法，本实验色谱条件下，同样能够达到较好的分离效果，只是存在分析保留时间偏长的问题，有待于进一步的试验探索。另外，本实验方法验证仅采用了三个批次的当归，批次数目有限，还需要大量的验证工作。
本试验创新点在于流动相采用价格低廉的甲醇代替了价格较贵的乙腈，比较2010年版《中国药典》方法经济，实惠，并在必要时可以同时测定川芎和当归中阿魏酸的含量，利于质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2010：141.