【摘 要】
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目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK293A细胞中,用G418持续筛选,培养
【机 构】
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北京大学口腔医学院修复科,首都医科大学附属北京口腔医院修复科,北京大学医学部心血管研究所基因转移与基因治疗实验室
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目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK293A细胞中,用G418持续筛选,培养扩增。收集细胞,加入RIPA细胞裂解液,粗提蛋白。通过镍金属螯合层析的方法,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Westernblot检测,检测蛋白纯化程度和产率。将釉原蛋白冻干,-80℃冻存。结果:SDS-PAGE及WesternBlot检测结果表明,蛋白粗提液中有大小约50KDa的重组釉原蛋白表达,经过
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