【摘 要】
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本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约670
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所;
【基金项目】
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国家科技支撑计划(No.2006BAD06A17-08);黑龙江省科技计划(No.GA06B202);现代农业产业技术体系建设专项资金(No.nycytx-0303)资助~~
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本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescript SK载体中,从而获得携带As01株基因组全长cDNA的重组质粒pBSAs。将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染BHK-21细胞,可观察到典型的细胞病变。对收获的病毒采用RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的Asia1型FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。该感染性克隆的构建,为深入研究FMDV的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。
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