【摘 要】
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目的 研究miR-125a-5p对急性髓系白血病(AML)细胞系增殖和侵袭的调控作用.方法 RT-qPCR检测AML患者骨髓标本、AML细胞系(U937和HL60)及外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125a-5p和TRIM71的表达.将U937和HL60细胞分为对照组(control)、miR-125a-5p模拟物组(miR-125a-5p mimic)、miRNA阴性对照组(miR-NC)、TRIM71过表达质粒组(pcDNA3.1-TRIM71)和对照质粒组(pcDNA3.1-NC).采用Lip
【机 构】
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陕西省人民医院 血液科,陕西 西安710068;陕西省人民医院 肾病血透中心,陕西 西安710068
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目的 研究miR-125a-5p对急性髓系白血病(AML)细胞系增殖和侵袭的调控作用.方法 RT-qPCR检测AML患者骨髓标本、AML细胞系(U937和HL60)及外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125a-5p和TRIM71的表达.将U937和HL60细胞分为对照组(control)、miR-125a-5p模拟物组(miR-125a-5p mimic)、miRNA阴性对照组(miR-NC)、TRIM71过表达质粒组(pcDNA3.1-TRIM71)和对照质粒组(pcDNA3.1-NC).采用Lipofectamine 2000将miR-125a-5p mimic、pcDNA3.1-TRIM71及阴性对照转染U937和HL60细胞.MTT法检测细胞增殖,基质胶侵袭试验测定细胞侵袭,流式细胞测量术检测细胞凋亡.RT-qPCR或Western blot检测TRIM71、Bax、Bcl-2、NF-κB p65的表达.通过荧光素酶报告基因验证miR-125a-5p和TRIM71的靶向调控关系.结果 与对照或PBMC相比,miR-125a-5p在AML患者骨髓样本和AML细胞系中的表达水平明显降低(P<0.05).与对照组相比,miR-125a-5p mimic组的U937和HL60细胞的增殖和侵袭能力明显降低,而细胞凋亡率明显升高(P<0.05).与对照组相比,pcDNA3.1-TRIM71组的U937和HL60细胞的增殖和侵袭能力明显升高(P<0.05).荧光素酶报告基因检测显示,miR-125a-5p mimic有效抑制了pGL3-TRIM71-WT的荧光素酶活性.与miR-125a-5p mimic组相比,(miR-125a-5p mimic+pcDNA3.1-TRIM71)组的细胞活力和细胞侵袭率显著增加,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).与miR-125a-5p mimic组相比,(miR-125a-5p mimic+pcDNA3.1-TRIM71)组的nucleus NF-κB p65蛋白表达水平显著增加(P<0.05).结论 上调miR-125a-5p通过靶向抑制TRIM71来降低AML细胞系的增殖和侵袭并诱导凋亡;miR-125a-5p可通过抑制NF-κB信号通路的活化来抑制AML细胞增殖.
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