目的 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOG~(Igd))为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并检测CD4~+CD25~+T细胞、Foxp3 mRNA等指标的表达.方法 采用分子克隆技术诱导表达MOG~(Igd)-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)、生理盐水免疫小鼠分别作为阴性、阳性及正常对照组.双盲法连续早晚观察30 d,通过评估动物的临床神经功能、组织病理(HE染色和Kluver-Barrera法髓鞘染色、免疫组化法)情况,评价模型的质量.流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞;real-time PCR检测Foxp3 mRNA的相对表达水平,并分析两者相关性.结果 MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异均无统计学意义(P>0.05).TrxA组及正常对照组无一动物发病.模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累.免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P<0.05);MOG组CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组和正常对照组(P<0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P<0.01).MOG组标准化Foxp3 mRNA的表达量为2.26±1.97,GPSCH组为1.44±1.20,均低于TrxA组的8.58±3.34(P<0.01);但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义(P>0.05).相关性分析显示,模型组小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞与Foxp3 mRNA表达水平间存在相关性(r=0.849,P<0.05).结论 用MOG~(Igd)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究多发性硬化的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础。
C57BL/6小鼠EAE模型的建立及Foxp3、CD4~+CD25~+调节性T细胞检测
【摘 要】
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目的 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOG~(Igd))为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并检测CD4~+CD25~+T细胞、Foxp3 mRNA等指标的表达.方法 采用分子克隆技术诱导表达MOG~(Igd)-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(Tr
【机 构】
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325000,温州医学院附属第一医院神经内科,325000,温州医学院附属第一医院神经内科,325000,温州医学院附属第一医院神经内科,325000,温州医学院附属第一医院神经内科,325000,温
【出 处】
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中华微生物学和免疫学杂志
【发表日期】
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2010年30期
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