RNAi沉默Survivin基因抑制人鼻咽癌细胞生长

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目的观察RNA干扰沉默Survivin基因对人鼻咽癌CNE2细胞在体内外生长的抑制作用。方法将Survivin特异性shRNA表达载体pGenesil-1-survivin经LipofectamineTM2000介导转染人鼻咽癌CNE2细胞,经G418筛选获得稳定转染的CNE2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测Survivin基因mRNA和蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力的变化。以稳定转染细胞建立裸鼠荷瘤模型,观测瘤体积的变化,绘制移植瘤生长曲线。结果流式细胞仪检测pGenesil-1-survivin细胞转染百分率为(87.13±2.21)%;RT-PCR和Western blot结果显示,pGenesil-1-survivin组对人鼻咽癌CNE2细胞Survivin mRNA和蛋白的抑制率分别为64.55%和51.24%,均较随机序列构建载体的阴性对照(pGenesil-1-NC)组和空白对照组明显下调(均P<0.05);MTT结果显示,pGenesil-1-survivin组细胞增殖能力明显较pGenesil-1-NC组和空白对照组降低(均P<0.05);体内实验表明,pGenesil-1-survivin组较pGenesil-1-NC组和空白对照组能有效抑制BALB/C裸鼠人鼻咽癌的生长(均P<0.05)。结论沉默Survivin基因可以有效抑制人鼻咽癌CNE2细胞在体内外的增殖,Survivin基因有望成为鼻咽癌基因治疗的有效靶点。
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