【摘 要】
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目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干
【机 构】
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天津医科大学附属天津市第四中心医院胃肠外科, 天津中医药大学, 天津医科大学附属天津第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室, 天津市环湖医院临床实验室
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目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干预；空载体转染组:对数生长期的细胞加入不同感染复数(MOI)的空载体腺病毒；Vpr转染组:加入不同MOI的含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(Adv-Vpr).应用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验；或采用双因素方差分析,组内比较采用t检验.结果 Vpr显著抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞MTT值为1.03±0.04,与空载体转染组(2.46 +0.15)及空白对照组(2.51±0.14)比较,差异有统计学意义(F=144.6,P＜0.05)；Adv-Vpr转染48 h后(MOI=200),Vpr转染组处于G2/M期的细胞比例及线粒体膜电位下降的细胞比例增加,分别为37.31％±5.90％和32.07％±5.64％,与空载体转染组(18.30％±6.04％、3.32％±0.79％)及空白对照组916.66％±3.51％、2.76％±1.43％)比较,差异有统计学意义(F=10.08,64.45,P＜0.05).Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞凋亡率为37.62％±6.48％,与空载体转染组(3.44％±1.11％)及空白对照组(2.93％±1.07％)比较,差异有统计学意义(F=122.4,P＜0.05).Adv-Vpr处理48 h后(MOI=200),Westem blot检测发现Vpr导致了Caspase-9、Caspase-3剪切为活性片段,p-Chk1-S345磷酸化增加,而Fas、Fas-L、ERK1及ERK2表达未见上调.结论 Vpr在体外能够有效抑制结肠癌细胞株HCT-8增殖,并诱导其细胞周期G2期阻滞及凋亡,其机制分别与DNA损伤信号通路激活及线粒体凋亡通路启动有关.Vpr在结肠癌的治疗中具有潜在的应用前景.
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