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目的
在真核系统中表达全长人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus 1, HIV-1)p24抗原，鉴定其抗原性，探讨其在HIV早期诊断中的价值。
方法利用PCR技术分别扩增p24基因和DRVI信号肽基因，通过融合PCR在p24基因前添加来自gp140质粒的DRVI信号肽序列，并分别将其克隆至pDRVI1.0载体，获得两种重组质粒pDRVI-p24和pDRVI-p24s。将重组质粒转染293F细胞，通过SDS-PAGE检测p24蛋白的表达与分泌，利用Ni-NTA金属螯合层析法和分子筛纯化p24s蛋白，并利用免疫印迹法检测该蛋白质的抗原特异性。通过间接ELISA法进行HIV-1阳性小鼠和HIV-1阳性感染者血清的检测。
结果成功构建了高效表达HIV-1 p24蛋白的真核表达系统，细胞上清中可检测到明显的p24s蛋白分泌。经HIV-1阳性和阴性小鼠，以及经临床验证的30份HIV-1阳性感染者和50份HIV阴性血清标本鉴定，重组蛋白具有较高的检出特异性和敏感性。
结论成功构建了HIV-1 p24抗原真核表达载体，表达纯化的p24s抗原具有较好的抗原性，初步建立了检测HIV-1的间接ELISA法，并证明该检测法具有较高的特异性和灵敏度，具有良好的应用前景。