【摘 要】
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目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交
【机 构】
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哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室,黑龙江,哈尔滨,150086哈尔滨医科大学附属二院药学部,黑龙江,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室,黑龙江,哈尔滨,150086;
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目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原.结果:获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系.杂交瘤细胞分泌的mAb Ig的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7.Western blot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带.免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合.该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符.对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ.结论:制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
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