【摘 要】
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为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小(或称C值)的方法,分别以新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料,采用Otto和LB01两种细胞核提取液,利用流式细胞术对
【机 构】
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陕西师范大学生命科学学院,西北濒危药材资源开发国家工程实验室
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为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小(或称C值)的方法,分别以新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料,采用Otto和LB01两种细胞核提取液,利用流式细胞术对黄芩C值进行测定。结果表明,选用豌豆为内标植物时,相比LB01一步法,Otto两步法在低温提取、离心和保存条件下,碘化丙啶染色浓度为0.02 mg/mL,得到的细胞核散点图相对集中,碎片较少,容易准确取门,CV较小。不同提取材料表明,幼嫩叶片和新鲜叶片利用Otto二步法均能得到高质量的细胞核悬液,细胞核数量多且散点图集中,有利于取门和测定的C值更准确。而干燥叶片提取的细胞核得到的散点图分散,无法准确取门和测定C值。最终,系统地优化了利用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小的方法,并首次成功测定黄芩1C值为0.58 pg,基因组大小约为562 Mbp。这一研究结果,将为了解黄芩的基因组值大小和利用流式细胞术测定其他药用植物C值提供参考,并将为黄芩属药用植物资源的遗传评价和保护利用等研究奠定基础。
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