【摘 要】
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通过分子克隆手段获得大肠杆菌来源的羧酸酯酶BioH，采用定向进化的方法提高该酶的水解活性以提升其应用价值．通过PCR扩增，从大肠杆菌K12菌株中克隆得到羧酸酯酶BioH基因，目的基因
【机 构】
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浙江大学化学工程与生物工程学系生物工程研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（21176215,21176102）
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通过分子克隆手段获得大肠杆菌来源的羧酸酯酶BioH，采用定向进化的方法提高该酶的水解活性以提升其应用价值．通过PCR扩增，从大肠杆菌K12菌株中克隆得到羧酸酯酶BioH基因，目的基因长度为771bp，含256个氨基酸；将其连接到pET30a（＋）质粒上并转入BL21（DE3）宿主细胞中，经诱导表达得到所需的目的蛋白，该蛋白分子质量约为28．2ku．野生型的BioH水解对硝基苯丁酸酯（P—NPB）的活性为18U／mg，且该酶具有良好的热稳定性．以PNPB为底物进行高通量筛选，其水解底物为对硝基苯酚（PNP）
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