【摘 要】
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目的探讨RhoA/ROCK信号通路在终板软骨细胞体外自然退变中的表达变化。方法提取大鼠终板软骨细胞并建立体外的终板软骨细胞自然退变模型，依次选取P2代细胞(空白对照组)至P5代细胞(自然退变组)，以及治疗组(P5代细胞加入ROCK信号通路抑制剂Y27632组)，倒置显微镜观察细胞形态，利用甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行观察及表型鉴定。激光共聚焦显微镜检测空白对照组和自然退变组的细胞骨架变化。RT-PC
【机 构】
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241001 安徽省芜湖市，皖南医学院第一附属医院弋矶山医院脊柱外科,241001 安徽省芜湖市，皖南医学院第一附属医院弋矶山医院脊柱外科,中国科学院上海生命科学研究院上海交通大学健康科学研究所骨科细
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目的探讨RhoA/ROCK信号通路在终板软骨细胞体外自然退变中的表达变化。
方法提取大鼠终板软骨细胞并建立体外的终板软骨细胞自然退变模型，依次选取P2代细胞(空白对照组)至P5代细胞(自然退变组)，以及治疗组(P5代细胞加入ROCK信号通路抑制剂Y27632组)，倒置显微镜观察细胞形态，利用甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行观察及表型鉴定。激光共聚焦显微镜检测空白对照组和自然退变组的细胞骨架变化。RT-PCR方法检测各组细胞中Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖基因及信号通路中ROCK-1、ROCK-2基因的表达变化；免疫印迹检测ROCK-1、ROCK-2蛋白表达变化及利用试剂盒检测RhoA蛋白活性表达变化。
结果随着体外自然传代的发生终板软骨细胞表型基因表达逐渐丢失；细胞骨架在激光共聚焦显微镜观察下可见P5代终板软骨细胞较P2代细胞骨架明显变细。自然退变组(P5代)终板软骨细胞较空白对照组(P2代细胞)Ⅱ型胶原(P5/P2＝0.248，P<0.001)、蛋白多糖(P5/P2＝0.172，P<0.001)及SOX9(P5/P2＝0.499，P<0.001)表达明显降低，RhoA/ROCK信号通路中关键基因ROCK-1(P5/P2＝0.625，P<0.001)表达降低、ROCK-2(P5/P2＝2.527，P<0.001)表达升高；而活性蛋白检测发现活性RhoA的量P5代较P2代明显增加。治疗组(P5代细胞中加入ROCK抑制剂Y27632)中抑制ROCK信号以后ROCK-1、ROCK-2表达较P5代细胞均明显降低，蛋白亦是如此。而治疗组中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9等基因表达则明显回升。
结论细胞体外自然传代从P2代细胞至P5代时，终板软骨细胞发生明显退变。并提示可通过调控RhoA/ROCK信号通路来保护终板软骨细胞退变。
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