体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达

来源 :安徽医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：weilove721

【摘要】

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目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码

【作者】

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陈鹤丹林煊谢颖陈尧杨君仪王赟张世超胡祖权曾柱

【机构】

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贵州医科大学生物与工程学院生物技术教研室,贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/医药生物技术工程研究中心,贵州医科大学基础医学院,贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部

【出处】

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安徽医科大学学报

【发表日期】

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2020年8期

【关键词】

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MAGE-A3 体外转录mRNA 蛋白表达 MAGE-A3in vitro transcribed mRNAprotein expression

【基金项目】

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国家自然科学基金(编号:81760556),贵州省科技计划项目(编号:黔科合基础[2016]1118),贵州省科技合作计划项目(编号:黔科合LH字[2015]7318),贵州医科大学2018年度学术新苗培养及创新探索专项项目(编号:黔科合平台人才[2018]5779-55),贵阳市科技计划项目(编号:筑科合同[20161001]40、筑科合同[2017]5-27号),贵州省卫生健康委科学技术基金项

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目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测M

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