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目的
探讨重组人S100钙结合蛋白A4(rhS100A4)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLSs)产生血管内皮生长因子(VEGF)的机制。
方法取行膝关节置换术的类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜组织行体外RAFLSs培养；CCK-8法检测rhS100A4及其与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rap)共同作用对RAFLSs增殖的影响；免疫荧光法检测rhS100A4及其与Rap共同作用对RAFLSs表达VEGF的影响；rhS100A4及其与Rap共同作用刺激RAFLSs形成条件培养基(CM)，观察CM刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）体外形成管腔的作用，检测S100A4血管生成能力；Western blot检测rhS100A4对RAFLSs mTORC1信号通路下游蛋白核糖体蛋白S6(S6)磷酸化水平的影响，分析rhS100A4与Rap共同作用对RAFLSs S6蛋白磷酸化水平及VEGF蛋白表达的影响。
结果rhS100A4促进RAFLSs增殖及VEGF蛋白水平表达，rhS100A4所形成CM促进HUVECs体外形成血管，Rap可抑制rhS100A4的上述生物学效应；rhS100A4激活RAFLSs mTORC1信号通路下游蛋白S6，使其磷酸化水平升高；rhS100A4增强RAFLSs细胞S6蛋白磷酸化水平及VEGF蛋白水平表达的作用可被Rap抑制。
结论S100A4通过激活mTORC1信号通路促进RAFLSs产生VEGF。