【摘 要】
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建立一种基于纳米磁珠为介质的核酸提取和富集方法,提高国产HBV核酸检测试剂的分析灵敏度,用于痕量HBV DNA的测定.方法选择经抗病毒治疗HBV DNA浓度≤1×104 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本50份.标准品采用WHO HBV DNA标准品.通过纳米磁珠实现对HBV核酸的吸附浓缩,提高提取的HBV核酸模板的浓度.以瑞士罗氏公司HBV DNA检测试剂和4种国产试剂原有的核酸提取检测方法为对照
【机 构】
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310003,杭州,浙江大学医学院附属第一医院检验中心,浙江大学传染病诊治国家重点实验室,310003,杭州,浙江大学医学院附属第一医院检验中心,浙江大学传染病诊治国家重点实验室,310003,杭州,
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建立一种基于纳米磁珠为介质的核酸提取和富集方法,提高国产HBV核酸检测试剂的分析灵敏度,用于痕量HBV DNA的测定.方法选择经抗病毒治疗HBV DNA浓度≤1×104 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本50份.标准品采用WHO HBV DNA标准品.通过纳米磁珠实现对HBV核酸的吸附浓缩,提高提取的HBV核酸模板的浓度.以瑞士罗氏公司HBV DNA检测试剂和4种国产试剂原有的核酸提取检测方法为对照,评价该方法对国产核酸检测试剂的改进效果.结果纳米磁珠核酸提取方法与国产试剂结合后,国产试剂的分析灵敏度分别达到10和50 IU/ml,与罗氏试剂的分析灵敏度12 IU/ml基本相当.4种国产试剂盒内自带提取试剂检测临床乙型肝炎患者血清中痕量HBV DNA阳性检出率分别为64%(32份)、56%(28份)、62%(31份)和58%(29份),与罗氏试剂阳性检出率88%比较,差异具有统计学意义(x2值分别为7.895、12.698、9.013、11.416,P均＜0.05).纳米磁珠核酸提取方法与国产试剂结合后,阳性检出率分别为88%(44份)、88%(44份)、88%(44份)和86%(43份),与罗氏试剂(88%)比较,阳性检出率差异无统计学意义(x2值分别为0.000、0.000、0.000、0.088,P均＞0.05).HBV核酸浓度为101～103 IU/ml时,病毒核酸浓度对数值与循环阈值呈负相关,但是比103～106 IU/ml浓度范围的相关性下降.结论以纳米磁珠为介质建立的核酸提取方法可显著提高国产HBV DNA检测的分析灵敏度,对监测乙型肝炎患者血液中痕量HBV DNA含量具有重要意义。
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