白藜芦醇对H2O2及TGF-β2诱导人小梁网细胞的影响及机制探讨

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目的:观察过氧化氢(H2O2)及转化生长因子(TGF)-β2诱导人小梁网细胞(HTMCs)后对纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白1型(COL1)、核因子(NF)-κB P65蛋白和白细胞介素(IL)-1β基因表达的影响及白藜芦醇(RSV)的干预作用。方法(1)选取汇合度70%~80%的HTMCs分为5组。实验组于无血清培养基中分别加入浓度为150、300、450、800μmol/L的H2O2处理,对照组的培养基中不加H2O2。Western blot法检测各组FN、COL1、NF-κB P65、NF-κB P65磷酸化(P-NF-κB P65)蛋白的表达,实时定量PCR法检测IL-1β基因的表达。(2)HTMCs细胞分为3组。对照组以不含H2O2及RSV的无血清培基处理,H2O2组以300μmol/L的H2O2处理,H2O2+RSV组同时加入300μmol/L的H2O2及25μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。免疫荧光检测各组NF-κB P65在HTMCs中的定位。(3)HTMCs细胞分为3组。对照组以不含TGF-β2及RSV的无血清培基处理,TGF-β2组以5μg/L的TGF-β2处理,TGF-β2+RSV组为同时加入5μg/L的TGF-β2及25μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。结果(1)与对照组比较,150、300、450、800μmol/L组FN和P-NF-κB P65蛋白表达水平均增高,300、450、800μmol/L组COL1蛋白和IL-1β基因表达水平增高(P<0.05),其他指标比较差异均无统计学意义。(2)H2O2组较对照组FN、COL1、P-NF-κB P65蛋白和IL-1β基因表达水平均增高,而H2O2+RSV组较H2O2组上述指标均降低,H2O2+RSV组较对照组仅IL-1β降低(P<0.05)。对照组仅细胞质表达NF-κB P65,H2O2组细胞胞质及核中均有NF-κB P65表达,且核中表达较多;H2O2+RSV组细胞胞质中表达NF-κB P65较核中多。(3)TGF-β2组较对照组FN、COL1、P-NF-κB P65的蛋白和IL-1β基因水平表达均增高(P<0.05),TGF-β2+RSV组较TGF-β2组上述指标均降低(P<0.05)。结论 H2O2和TGF-β2能上调HTMCs的FN、COL1、P-NF-κB P65蛋白及IL-1β基因的表达,可能参与青光眼的发生发展过程。RSV能抑制H2O2和TGF-β2对HTMCs的影响,对青光眼发挥一定的保护作用。
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