【摘 要】
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流产衣原体是导致绵羊地方性流产的主要病原体,对全球畜牧业经济发展构成了巨大威胁.为建立一种灵敏、特异且快速检测流产衣原体的实时荧光定量PCR方法,依据衣原体蛋白酶样活性因子基因组序列设计了针对检测流产衣原体的引物和TaqMan探针,对反应体系和反应条件进行了优化,对方法的灵敏度、特异性及重复性进行了评价,并初步应用于临床样本检测.结果显示,该方法的最低检测限为26 copies/μL,灵敏度是普通PCR的10倍;与其他可以引起类似症状的病原体无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3％;对156份流产羊拭子的
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州
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流产衣原体是导致绵羊地方性流产的主要病原体,对全球畜牧业经济发展构成了巨大威胁.为建立一种灵敏、特异且快速检测流产衣原体的实时荧光定量PCR方法,依据衣原体蛋白酶样活性因子基因组序列设计了针对检测流产衣原体的引物和TaqMan探针,对反应体系和反应条件进行了优化,对方法的灵敏度、特异性及重复性进行了评价,并初步应用于临床样本检测.结果显示,该方法的最低检测限为26 copies/μL,灵敏度是普通PCR的10倍;与其他可以引起类似症状的病原体无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3％;对156份流产羊拭子的基因组进行检测,流产衣原体的检出率为78.21％.研究表明,该方法可以很好地应用于流产衣原体的大规模临床样本检测,为流产衣原体病的高通量检测和流行病学调查提供技术手段.
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