【摘 要】
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目的 研究miR-384-5p是否通过调节肾小管上皮细胞BMP7转录而影响肾纤维化。方法 建立小鼠单侧输尿管阻塞模型(unilateral ureteral obstructive, UUO),流式细胞仪荧光激活细
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81200528);陕西省自然科学基金(No.2009JQ4012);“十二五”国家科技支撑计划课题(No.2011BAll0804,2015BAI12B05)
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目的 研究miR-384-5p是否通过调节肾小管上皮细胞BMP7转录而影响肾纤维化。方法 建立小鼠单侧输尿管阻塞模型(unilateral ureteral obstructive, UUO),流式细胞仪荧光激活细胞分选(FACS)分离肾组织为肾小管上皮细胞进行培养,通过脂质体转染表达miR-384-5p的质粒、表达反义miR-384-5p的质粒及空白质粒;通过静脉注射空质粒(n=10)或反义-miR-384-5p质粒(n=10),14周后处死UUO模型小鼠,肾组织切片进行Masson三色染色评估肾纤维化程度;Western blot和实时定量PCR检测miRNA靶基因(miR-384-5p、miR-30、miR-92和miR-128)表达。结果 UUO模型14 d时出现明显肾脏纤维化,肾组织BMP7 mRNA明显增加,但BMP7蛋白无明显增加。miR-384-5p没有影响肾小管上皮细胞中BMP7 mRNA表达,但是过表达miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显减少,过表达反义miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显增加。免疫组化和定量PCR检测显示,UUO小鼠14 d肾组织纤维化显著增加,而注射反义miR-384-5组肾组织纤维化程度明显减轻。虽然反义-miR-384-5p处理后不影响BMP7 mRNA水平,但能明显增加肾脏组织BMP7蛋白表达,提示抑制miR-384-5p能减轻UUO大鼠的肾损伤。结论 miR-384-5p是调节肾损伤后纤维化机制的关键因子,靶向miR-384-5p有希望成为防治肾脏纤维化的新方法。
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