探讨自噬在饱和氢盐水减轻肝移植术大鼠肝细胞凋亡中的作用。
方法SPF级成年健康雄性SD大鼠56只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为4组：假手术组(S组，n＝8)、肝移植组(OLT组，n＝16)、饱和氢气盐水组(HS组，n＝16)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(M组，n＝16)。OLT组、HS组和M组受体和供体各8只。M组术前1 h腹腔注射3-甲基腺嘌呤2.5 mg/kg。采用改良的Kamada二袖套法建立肝移植模型。于肝下下腔静脉开放即刻HS组和M组经肝下下腔静脉注射4 ℃饱和氢盐水6 ml/kg，OLT组注射4 ℃生理盐水6 ml/kg。OLT组、HS组和M组于门静脉开放后6 h，S组于术毕后6 h时，经肝下下腔静脉采集血样，检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)浓度。取血结束后，取肝脏组织，观察病理学结果，并行病理学评分；检测MDA含量和SOD活性；采用TUNEL法检测细胞凋亡水平，计算凋亡指数；电镜下观察超微结果；采用Western blot法检测肝组织细胞质总p53、磷酸化p53(p-p53)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、caspase-3和细胞色素c(Cyt c)的表达水平。以p-p53/总p53比值反映p53的磷酸化水平。
结果与S组比较，OLT组、HS组和M组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和凋亡指数升高，SOD活性降低，caspase-3和Cyt c表达上调，OLT组和HS组肝组织LC3Ⅱ和Beclin-1表达上调，HS和M组肝组织p-p53/总p53比值升高(P<0.05)；与OLT组比较，HS组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和凋亡指数降低，SOD活性升高，caspase-3、Cyt c、LC3Ⅱ和Beclin-1表达下调，p-p53/总p53比值升高(P<0.05)，肝细胞超微结构改变减轻，自噬小体减少；与HS组比较，M组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和凋亡指数降低，SOD活性升高，caspase-3、Cyt c、LC3Ⅱ和Beclin-1表达下调(P<0.05)，p-p53/总p53比值差异无统计学意义(P>0.05)，自噬小体减少。
结论饱和氢盐水减轻肝移植术大鼠肝细胞凋亡的机制与增强细胞质p53活性，从而抑制自噬有关。