【摘 要】
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目的 观察阻断转录因子Sp1蛋白及其和顺式作用元件的结合,对Ki-67基因转录的抑制作用.方法 Sp1小干扰RNA(Sp1-siRNA)、Sp1蛋白竞争剂光神霉素分别作用于宫颈癌Hela细胞、人肾
【机 构】
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徐州医学院附属医院肿瘤中心,江苏省肿瘤生物治疗重点实验室
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目的 观察阻断转录因子Sp1蛋白及其和顺式作用元件的结合,对Ki-67基因转录的抑制作用.方法 Sp1小干扰RNA(Sp1-siRNA)、Sp1蛋白竞争剂光神霉素分别作用于宫颈癌Hela细胞、人肾癌OS-RC-2和肺癌A549细胞.Western blot检测Hela细胞Sp1蛋白表达.细胞免疫组织化学检测3种肿瘤细胞Ki-67蛋白表达.Sp1-siRNA或光神霉素与Ki-67基因核心启动子pGLBK235共转染上述3种肿瘤细胞,双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性.结果 Sp1-siRNA处理的Hela细胞Sp1蛋白表达显著减少.Sp1-siRNA、光神霉素处理的3种肿瘤细胞Ki-67蛋白均显著减少.Sp1-siRNA共转染的质粒pGLBK235启动子活性在Hela、OS-RC-2、A549细胞中分别降至单独转染pGLBK235的45.9%、64.5%、46.0%;光神霉素共转染的pGLBK235启动子活性随着药物浓度的升高而降低,其中药物浓度为500 nmol/L时其活性最低,在Hela、OS-RC-2、A549细胞分别降至单独转染pGLBK235的34.7%、44.2%、29.8%.结论 抑制Sp1蛋白或是阻断其与Sp1顺式作用元件的结合,可以有效抑制Ki-67基因转录.
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