构建稳定表达乙型肝炎病毒（HBV）野生株和rtE218G阿德福韦酯耐药变异株的人细胞模型，评价HBV野生株和rtE218G变异株的体外药物敏感性。
方法基于人肝细胞系HepG2，构建整合表达四环素调控元件（tTA）的工具细胞株；重组HBV野生株和rtE218G变异株HBV 1.2倍拷贝基因组至pTRE-Tight载体，与线性筛选标记物共转染tTA稳定表达细胞系，潮霉素筛选克隆，长期传代培养后，挑选受四环素严格调控表达的HBV高水平复制克隆，并对上述HBV野生株和变异株对阿德福韦酯的体外敏感性进行评价。
结果克隆筛选获得tTA稳定表达的细胞株HepG2-off23，构建了HBV野生株和rtE218G变异株四环素调控表达质粒pTRE-HBV-WT（野生型）和pTRE-HBV-E218G（变异型），分别稳定转染HepG2-off23细胞后，成功筛选得到基于HepG2的野生型和变异型HBV高水平可调控表达细胞株HepG2-tetHBV-WT(HBV野生株）和HepG2-tetHBV-E218G（rtE218G变异株）。培养144 h后，可检测到胞内HBV核心抗原（HBcAg）的高表达和病毒DNA复制中间体的高水平复制；且该细胞模型中的病毒复制可被培养体系中加入的四环素高效阻断，当四环素浓度为1 000 ng/ml时，Southern印迹检测不到复制中间体的存在。体外药物敏感性实验中，阿德福韦酯体外能够有效抑制HBV野生株的复制，半数抑制浓度（IC50）为（2.49±0.05）μmol/L，而rtE218G变异株表现出对阿德福韦酯的敏感性降低，其IC50为（6.49±0.09）μmol/L。
结论构建了基于四环素调控表达的HBV野生株和rtE218G变异株稳定复制细胞模型。HepG2-off23工具细胞系结合pTRE-HBV载体，可以较为方便地构建HBV不同变异株的稳定细胞模型，为HBV病毒学研究和抗病毒药物筛选模型的建立提供有力支持。