【摘 要】
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[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程
【机 构】
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复旦大学公共卫生学院; 复旦大学生殖与发育研究院上海市计划生育科学研究所国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室; 上海市疾病预防控制中心健康危害因素监测与控制所;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(编号:31540038);上海市科委实验动物研究专项(编号:15140901200);上海市第四轮公共卫生三年行动计划重点学科建设计划—环境卫生学与劳动卫生学(编号:15GWZK0201);上海市青年科技英才扬帆计划(编号:15YF1410000)
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[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法。[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1~2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系。将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定。[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼。EE2诱导Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关。当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP。当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达。[结论]采用Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况。
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