羽扇豆醇对人肝癌细胞HepG2和SK-HEP-1侵袭、转移的影响及机制研究

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上皮-间质转化(EMT)广泛存在于胚胎发育中,与细胞的迁移、侵袭密切相关.肿瘤中EMT水平升高表现为上皮型钙黏附素(E-cadherin)被神经型钙黏附素(N-cadherin)取代,间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达上调等.据报道,羽扇豆醇可降低基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和N-cadherin蛋白表达抑制人肉骨瘤细胞转移,调控MMP-9 mRNA表达抑制Huh-7细胞侵袭.但羽扇豆醇在肝癌方面的研究较少,因此该文探讨羽扇豆醇对肝癌细胞体内外侵袭转移的作用及其可能机制.采用MTT法和Annexin V/PI 双染法检测羽扇豆醇对HepG2细胞和SK-HEP-1 细胞活力、凋亡的影响.Transwell法检测羽扇豆醇对细胞侵袭能力的影响.Western blot法检测迁移相关蛋白E-cad-herin,N-cadherin,α-SMA,vimentin和MMP-9的表达水平.建立裸鼠皮下移植瘤模型以及H22肝癌细胞肺部转移模型,HE染色结合免疫组化法观察羽扇豆醇体内抗肿瘤生长和抑制肺转移的疗效.结果显示,羽扇豆醇(50,100 μmol·L-1)显著抑制细胞活性,诱导细胞凋亡;羽扇豆醇(5,10,20 μ-mol·L-1)可剂量依赖性地抑制HepG2细胞和SK-HEP-1 细胞侵袭,同时诱导上皮.间质转化(EMT)标志蛋白E-cadherin表达,降低N-cadherin,α-SMA,vimentin和MMP-9蛋白表达.体内实验显示,羽扇豆醇抑制异种移植HepG2细胞荷瘤小鼠肿瘤的生长,上调肿瘤组织中E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin蛋白表达;同时减少肝癌H22细胞在小鼠肺部转移灶的形成.以上结果表明,羽扇豆醇抑制肝癌细胞侵袭转移的机制可能与其调控EMT过程相关.
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