【摘 要】
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目的 观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HMrSV5)凋亡的影响及其抗凋亡机制.方法 ①体外培养
【机 构】
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南京中医药大学附属医院肾内科,江苏南京210029
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目的 观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HMrSV5)凋亡的影响及其抗凋亡机制.方法 ①体外培养HMrSV5细胞株,CCK-8法检测不同浓度PDS(1.5％、2.5％、3.0％、3.5％、4.25％ PDS)及不同浓度APS(50、75、100、200、300、400、500、600、800μg·mL-1)对细胞活力的影响,根据CCK-8检测结果筛选用于后续实验PDS及APS的合适浓度;②将实验分为4组:空白组、APS(100 μg·mL-1)组、PDS(3.0％)组、PDS+ APS(3.0％+ 100 μg·mL-1)组,相差显微镜观察细胞形态变化,通过JC-1法测定线粒体膜电位的去极化;TUNEL技术检测各组细胞凋亡情况;③Westem Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白的表达.结果 (①不同浓度PDS作用下HMrSV5细胞活力均下降,呈浓度依赖(P ＜0.01);25～100 μg·mL-1的APS能提高PDS对HMrSV5细胞的抑制作用,且100 μg·mL-1 APS组最显著(P＜0.01).②与空白组相比,PDS模型组细胞形态变小、拉长,细胞内出现空泡样变,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率增加;与PDS模型组比较,PDS+ APS组细胞形态有所恢复,细胞内空泡样变减轻,线粒体膜电位水平升高,细胞凋亡率降低.③与空白组相比,PDS模型组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与PDS模型组相比,PDS+ APS组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05).结论 APS能改善高糖腹透液对HMrSV5细胞诱导的凋亡,其机制可能是影响与线粒体凋亡相关的Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达.
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