【摘 要】
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以高通量药物筛选为目的,构建转录因子STAT元件驱动的萤火虫荧光素酶报告载体,并进行功能初步验证.人工合成含IRF-1和C-FOS基因上游调控序列中的2个STAT元件的DNA片段,克隆于
【机 构】
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右江民族医学院生物化学教研室,广州医学院实验医学研究中心,
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以高通量药物筛选为目的,构建转录因子STAT元件驱动的萤火虫荧光素酶报告载体,并进行功能初步验证.人工合成含IRF-1和C-FOS基因上游调控序列中的2个STAT元件的DNA片段,克隆于pGL3-promoter报道质粒作为报道载体pSTAT-luc;为检测其对不同有效因子刺激的反应性,该报道载体与荧光内参照载体pRL-SV40瞬时共转染不同细胞,在各种因子刺激条件下,双荧光素酶检测系统测定化学发光强度.结果显示,pSTAT-luc的报道基因载体符合预期设计;该载体转染细胞实验显示,在STAT途径阳性的HeLa、A549和MCF-7细胞中,特异刺激因子INF-γ和抑瘤素OSM处理能够剂量依赖性的引起细胞内萤火虫荧光素酶的升高;在STAT途径阴性的PC-12细胞,上述因子不能引起荧光素酶的活性改变;以非该途径因子刺激时,HeLa、A549和MCF-7细胞未见发光水平的改变.结果表明,构建的报道系统具有阳性细胞反应特异性以及阳性刺激-反应特异性,能够用于建立靶向STAT信号通路的高通量药物筛选平台.
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