【摘 要】
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目的研究晚期氧化蛋白产物(AOPP)通过NADPH氧化酶途经诱导小鼠成骨样细胞(MC3T3-E1)产生ROS。方法实验分为空白对照组、RSA(鼠血清白蛋白)组、AOPP组。培养MC3T3-E1细胞，加入RSA和不同浓度的AOPP，用2，7-二氯二氢荧光素二乙酯为荧光探针流式细胞仪检细胞内活性氧簇(ROS)的生成量。在阻断实验中，MC3T3-E1细胞分别与各种可能产生活性氧的酶的抑制剂孵育后加入AO
【机 构】
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目的研究晚期氧化蛋白产物(AOPP)通过NADPH氧化酶途经诱导小鼠成骨样细胞(MC3T3-E1)产生ROS。
方法实验分为空白对照组、RSA(鼠血清白蛋白)组、AOPP组。培养MC3T3-E1细胞，加入RSA和不同浓度的AOPP，用2，7-二氯二氢荧光素二乙酯为荧光探针流式细胞仪检细胞内活性氧簇(ROS)的生成量。在阻断实验中，MC3T3-E1细胞分别与各种可能产生活性氧的酶的抑制剂孵育后加入AOPP，观察阻断剂对ROS生成的阻断作用。采用Western印迹和免疫荧光法观察NADPH氧化酶亚基的变化。
结果分别采用50、100、200 μg/ml AOPP刺激MC3T3-E1细胞，细胞ROS的生成随着AOPP浓度的升高而逐渐增加，其中200 μg/ml AOPP产生的ROS最多(P<0.05)。AOPP诱导MC3T3-E1生成ROS还表现为时间依赖性，AOPP刺激30 min即可引起ROS生成增加(P<0.05)，3 h达峰。加入不同的酶阻断剂后，仅NADPH氧化酶抑制剂二苯碘鎓(DPI)、夹竹桃麻素(apocynin)、胞浆型超氧化物歧化酶C-SOD抑制了ROS的生成(P<0.05)。同时，AOPP刺激后p47phox有明显的膜迁移，并可诱导MC3T3-E1细胞Nox4蛋白表达上调。
结论 AOPP通过NADPH氧化酶途径诱导MC3T3-E1细胞产生ROS，推测这可能是AOPP参与骨质疏松发病的机制。
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