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目的
建立多重Taqman探针实时RT-PCR法同步检测肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16型（CA16）和包括EV71、CA16的肠道病毒通用型（EV）。
方法回顾性研究。根据EV71、CA16和EV的保守序列，设计并合成相应的引物和探针，对该体系进行灵敏度、特异性和重复性验证。收集2012年4至7月南京医科大学附属南京儿童医院收治的176例疑似手足口病患儿咽拭子标本作为实验组，另收集10名在此期间到我院体检的健康儿童、10例门诊流感样患儿和90例我院呼吸科收治的呼吸系统疾病患儿咽拭子标本作为对照组。应用该方法对以上286份标本进行EV71/CA16/EV的同步检测。应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。
结果该方法EV71、CA16和EV 3个通道的检测限均为1.0×103拷贝/ml；对9株肠道病毒和3株非肠道病毒毒株核酸的检测结果均正确，特异度100%；对1.0×103拷贝/ml、1.0×104拷贝/ml、1.0×105拷贝/ml的重组质粒进行重复性实验，其变异系数分别为0.44%~1.04%，0.38%~0.73%，0.46%~0.90%；运用多重Taqman探针实时RT-PCR法与实时RT-PCR法对176例疑似手足口病患儿临床标本进行检测和结果比对，两种方法的一致性为97.2%（171/176），Kappa=0.94。
结论建立了同步检测EV71/CA16/EV的多重Taqman探针实时RT-PCR法，该方法灵敏度高，特异性好，可为临床快速诊断EV71、CA16和EV感染提供依据，有较强的临床及科研应用前景。（中华检验医学杂志,2013,36:845-849）