【摘 要】
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目的探讨干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定。方法针对PRMT5设计出该基因的有效短发夹RNA（shRNA）片段，选择合适慢病毒载体，通过基因工程技术，
【机 构】
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江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科
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目的探讨干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定。方法针对PRMT5设计出该基因的有效短发夹RNA（shRNA）片段，选择合适慢病毒载体，通过基因工程技术，构建出PRMT5慢病毒载体介导的shRNA重组载体，并通过PCR以及测序检测构建序列的正确性。将重组病毒载体在病毒包装细胞中大量生产后，用病毒原液感染PRMT5表达量相对较高的SMMC-7721、BEL-7402细胞，2d后，用最低杀死浓度的嘌呤霉素进行筛选，得到克隆样生长的细胞，扩大培养后分别提取蛋白和RNA，We
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