【摘 要】
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以马铃薯抗青枯病品种为试验材料,采用mRNA微量制备和cDNA快速合成系统,以噬菌体λgt11为载体,构建cDNA表达文库.以32 kD抗菌蛋白API抗体为探针,采用免疫杂交技术筛选得到了
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;
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以马铃薯抗青枯病品种为试验材料,采用mRNA微量制备和cDNA快速合成系统,以噬菌体λgt11为载体,构建cDNA表达文库.以32 kD抗菌蛋白API抗体为探针,采用免疫杂交技术筛选得到了阳性克隆.采用改进的裂解法纯化重组λgt11 DNA,经EcoR I酶切后,直接将目的片断亚克隆到pGEM7Zf(+)质粒上,经凝胶电泳检测出3个携带有0.5～0.6 kb cDNA片断的重组质粒.序列测定后,共获得编码32 kD抗菌蛋白靠近基因3端PolyA尾部的538个核苷酸序列.在国内外首次利用抗体探针获得了植物抗病蛋白编码基因的部分序列,为进一步克隆全长的API蛋白基因奠定了基础.
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