【摘 要】
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目的:探索建立稳定有效的脐静脉内皮细胞体外培养方法。方法:用0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养液中培养,用胰蛋白酶-EDTA进
【机 构】
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昆明医科大学第一附属医院心内科; 云南省第一人民医院口腔内科;
【基金项目】
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云南省教育厅科学研究基金项目(08Y0222)
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目的:探索建立稳定有效的脐静脉内皮细胞体外培养方法。方法:用0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养液中培养,用胰蛋白酶-EDTA进行消化传代培养,用光镜和免疫组化方法对培养的细胞进行形态观察和鉴定。结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第4~5天后融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组化可见胞浆中第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为内皮细胞。结论:脐静脉灌注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,细胞可传代5-6次,但细胞产出量不高,不能传10代以上,5代以后细胞形态变化较大,对于复杂的基础研究应用受限。
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