【摘 要】
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根据6型猪细小病毒（porcine parvovirus 6,PPV6）和4型猪细小病毒（porcine parvovirus 4,PPV4）全基因组的保守区域基因序列，分别设计了2对特异性的引物和2种不同荧光基团标记的Taqman探针。经过条件优化，建立能够同时诊断PPV6和PPV4的双重荧光定量PCR方法，并对其特异性、灵敏性、稳定性以及与常规PCR方法的符合率进行研究。结果显示，该方法能够同
【基金项目】
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中央引导地方科技发展专项资助项目（2021L3028）； 福建省科技重大专项资助项目（2019NZ09005）； 福建省大学生创新创业训练计划资助项目（S202211312046）； 龙岩市科技计划重大项目（2019LY1001）； 福建省上杭县奇迈科技创新基金资
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根据6型猪细小病毒（porcine parvovirus 6,PPV6）和4型猪细小病毒（porcine parvovirus 4,PPV4）全基因组的保守区域基因序列，分别设计了2对特异性的引物和2种不同荧光基团标记的Taqman探针。经过条件优化，建立能够同时诊断PPV6和PPV4的双重荧光定量PCR方法，并对其特异性、灵敏性、稳定性以及与常规PCR方法的符合率进行研究。结果显示，该方法能够同时检测鉴别PPV6和PPV4,且特异性良好，与猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及猪细小病毒1型核酸均无交叉反应；本方法灵敏性强，PPV6和PPV4的最小检出限分别为7.7拷贝/μL和9.3拷贝/μL;组间和组内变异系数均未超过2%,具有良好的重复性；利用所建立的双重荧光定量PCR方法对福建省采集的68份猪血清及20份组织样本进行检测，PPV6阳性率为37.5%（33/88）,PPV4阳性率为12.5%（11/88）,混合感染率为11.36%,该结果与常规PCR的符合率分别为81.8%（PPV6）,90.9%（PPV4）和90.05%（混合感染率）,并且常规PCR鉴定的阳性样品通过本研究建立的方法复检时均未出现漏检。结果表明，本试验建立的检测方法对PPV6和PPV4的鉴别诊断、病原监测、流行病学调查等具有重要意义。
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