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目的
观察布鲁菌外膜蛋白（OMP）16脂化型（L16）和非脂化型（U16）对成骨细胞的毒力效应。
方法利用大肠埃希菌BL21（DE3）原核表达系统制备L16和U16重组蛋白，并使用镍柱纯化。采用成组设计，利用小鼠成骨细胞系（MC3T3细胞）分别与L16和U16重组蛋白共孵育（L16、U16刺激组），以布鲁菌脂多糖（LPS）刺激物为阳性对照（LPS对照组），未加任何刺激的细胞作为阴性对照，孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力；离心收集培养细胞上清，生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的释放率，评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用；进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率，以及通过免疫印迹法（WB）检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。
结果L16刺激组细胞活力[（56.16±1.63）%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[（97.02±1.44）%、（98.64±0.90）%，P均< 0.01]，LDH释放率[（84.64±0.96）%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[（34.82±3.41）%、（26.75±1.95）%，P均< 0.01]。Annexin Ⅴ-PE/7-AAD染色结果显示，L16刺激组细胞凋亡率为（46.45±2.19）%，而其余组均< 1%。WB结果显示，L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3，而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。
结论L16能诱导成骨细胞的凋亡，使成骨细胞的增殖受到抑制，而U16的作用不明显，具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。