【摘 要】
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目的构建白念珠菌RAD23高表达菌株,探索其高表达对细胞耐受遗传毒性试剂胁迫的影响。方法采用瞬时CRISPR/Cas9系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及含MET3启动子的修复DNA
【基金项目】
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江苏省南通市科技计划项目(No.JC2018052);南通大学大学生创新训练计划项目(No.2019095);江苏高校优势学科建设工程资助项目(No.PAPD)
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目的构建白念珠菌RAD23高表达菌株,探索其高表达对细胞耐受遗传毒性试剂胁迫的影响。方法采用瞬时CRISPR/Cas9系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及含MET3启动子的修复DNA,通过醋酸锂法转化白念珠菌野生型菌株,于SD-Ura-Met-Cys培养基筛选转化子,通过菌落PCR验证基因型,通过Western blot检测Rad23相对表达量,利用平板表型试验检测RAD23高表达对细胞耐受遗传毒性试剂的影响。结果成功构建了RAD23高表达菌株;与野生型菌株相比,高表达菌株中RAD23蛋白相对表达量约为野生型菌株的7倍(10.20 VS 1.46);在UV胁迫条件下,RAD23高表达菌株存活率显著下降(与野生型菌株相比,下降约1 000倍)。结论利用CRISPR/Cas9系统快速构建了白念珠菌RAD23高表达菌株,且RAD23高表达会抑制细胞对遗传毒性试剂UV的耐受能力。
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