汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型研究

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目的研制新的汉坦病毒核衣壳工程抗原,建立肾综合征出血热病毒检测和基因分型方法。方法以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。用另组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个汉坦毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用Rsa Ⅰ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)分型法。结果非融合表达产量虽不及融合表达高,但以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1:10000,显示出良好的生物活性。RT-PCR检测结果表明,所有的毒株扩增出汉坦特异性核酸组份(299 bp或577 bp)。用RT-PCR-RFLP法分型,上述毒株被定为汉滩型的9株,汉城型的8株,余3株未能定型。结论非融合表达的小分子抗原生物活性较高,有望替代天然抗原用于HV抗原抗体检测。RT-PCR法与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100%和84.6%,符合率为84.6%,但前者比后者敏感性高15.4%。RT-PCR-RFLP分型法与血清学分型法所得结果具有很高的符合率,但RFLP法的分型率为85%(17/20),血清法的分型率为55%(11/20),前者比后者高30%。
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