【摘 要】
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目的 克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性. 方法 基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选
【机 构】
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暨南大学基础医学院病原生物学教研室,广州,510632;暨南大学基础医学院临床医学系,广州,510632;中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广州,510080
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目的 克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性. 方法 基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选获得AcCBL1和AcCBL2基因,构建pET-28a-AcCBL1和pET-28a-AcCBL2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPFG)诱导表达、镍柱纯化后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况.蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白对6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清的免疫反应性. 结果 AcCBL1和AcCBL2基因PCR扩增产物分别约为1 000、1 100 bp.SDS-PAGE结果显示,rAcCBL1为可溶表达蛋白,相对分子质量(Mr)约为37 800;rAcCBL2主要以包涵体形式存在,约为Mr 40 800.Western blotting结果显示,rAcCBL1和rAcCBL2能与6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清特异性结合. 结论 成功克隆和表达AcCBL1和AcCBL2基因,二者表达产物均具有良好的免疫反应性.
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