【摘 要】
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利用PCR技术从枯草芽孢杆菌T66(Bacillus subtilis)基因组DNA中扩增得到果胶裂解酶编码基因pl(GU644446),并构建基因表达载体pPAL7-pl重组质粒,转化受体菌E.coli BL21进行原
【机 构】
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西北农林科技大学农学院; 中国农业科学院生物质能源研究中心; 中国农业科学院麻类研究所;
【基金项目】
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国家科技支撑计划项目(2007BAD41B02);农业部农村能源综合建设项目(2130138-018);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目(2060302-13)
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利用PCR技术从枯草芽孢杆菌T66(Bacillus subtilis)基因组DNA中扩增得到果胶裂解酶编码基因pl(GU644446),并构建基因表达载体pPAL7-pl重组质粒,转化受体菌E.coli BL21进行原核表达分析。诱导表达条件为温度37℃、时间4 h、IPTG浓度0.8 mol/L,经SDS-PAGE分析表明果胶裂解酶编码基因pl表达的重组酶蛋白相对分子质量为45 ku。对该基因重组酶粗酶液的酶学性质进行了初步分析,表明该酶最适反应温度为50℃、最适反应pH8,添加5.5 mmol/L的Ca2+的条件下,测得果胶裂解酶的最高比酶活为30 U/mL。含有果胶裂解酶编码基因pl的重组质粒遗传稳定。
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