非泛素化蛋白降解体系靶向敲减KRAS癌蛋白的初步研究

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目的:尝试构建能与KRAS癌蛋白相互作用的“RBD+ODC”融合蛋白,经由“乌苷酸脱羧酶/抗酶”系统(onithine decarboxyl-ase/antizyme,ODC/AZ)在蛋白水平直接实现对KRAS癌蛋白的降解。方法:应用分子克隆的方法构建AZ、ODC、“RBD+ODC”、突变体“RBD+ODC”、突变体KRAS等真核表达质粒,分别瞬时转染人HEK293T和胰腺癌细胞PANC-1,应用Westernblot法在蛋白水平直接检测外源性和内源性KRAS表达水平的改变,应用Co-IP法检测到“RBD
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