【摘 要】
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目的建立巨噬细胞RAW264.7和成肌细胞C2C12共培养体系,检测该共培养体系下培养不同时长RAW264.7和C2C12间的相互作用。方法 Transwell小室内以成肌分化培养基共培养RAW264. 7
【机 构】
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南京体育学院运动健康学院运动康复教研室; 北京体育大学运动生理学教研室; 江苏省体育科学研究所竞技体育与科研服务二中心;
【基金项目】
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江苏省高校自然科学研究面上项目(18KJB180013)~~
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目的建立巨噬细胞RAW264.7和成肌细胞C2C12共培养体系,检测该共培养体系下培养不同时长RAW264.7和C2C12间的相互作用。方法 Transwell小室内以成肌分化培养基共培养RAW264. 7和C2C12,相差显微镜观察细胞形态,共培养1、3、5 d后,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测Myf5、MyoD、myogenin、iNOS和Arg-1蛋白水平,ELISA法检测培养细胞上清液IL-1β和IL-10分泌量。结果①共培养对C2C12的影响:加快成肌分化进程、促进多核肌管形成,与同时间点对照组相比,共培养1 d即抑制Myf5蛋白表达(P<0.05),增加MyoD(P<0.05)和myogenin(P<0.01)蛋白表达;共培养3 d抑制Myf5蛋白表达(P<0.01),增加MyoD蛋白表达(P<0.01);共培养5 d降低细胞活性(P<0.05)并降低Myf5蛋白表达(P<0.01),增加肌管面积(P<0.01)。②共培养对RAW264.7的影响:共培养对细胞形态无明显影响,与同时间点对照组相比,共培养1 d抑制iNOS蛋白表达(P<0.01)和IL-1β分泌(P<0.05),增加Arg-1蛋白表达(P<0.01);共培养3 d抑制iNOS蛋白表达和IL-1β分泌(P<0.01),增加Arg-1蛋白表达(P<0.01)和IL-10分泌(P<0.05);共培养5 d细胞簇集更加明显,促进细胞增殖(P<0.05),抑制iNOS蛋白表达和IL-1β分泌(P<0.01),增加IL-10分泌(P<0.05)。结论 C2C12和RAW264.7共培养促进成肌细胞的成肌分化以及巨噬细胞的增殖和M2型极化。
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