【摘 要】
：
目的:构建含活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基(去除氨基酸702～712的mTERT,命名为mTERT△)基因的慢病毒载体,检测其表达和功能.方法:从先前构建的表达mTERT全长的pDC315-EGFP-mTER
【机 构】
：
南京医科大学药学院药理学系,江苏南京210029
论文部分内容阅读
目的:构建含活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基(去除氨基酸702～712的mTERT,命名为mTERT△)基因的慢病毒载体,检测其表达和功能.方法:从先前构建的表达mTERT全长的pDC315-EGFP-mTERT质粒中,通过缺失突变PCR扩增小鼠mTERT△基因,构建真核表达载体GV287-EGFP/mTERT△.鉴定正确后将目的基因克隆人慢病毒载体pGC-LV,得重组载体pGC-LV/mTERT△-EGFP,采用Lipofectamine2000将其转染293T细胞,包装慢病毒颗粒LV-mTERT△-EGFP后感染神经干细胞和原代神经元,TRAP-PCR方法检测端粒酶活性,荧光显微镜观察目的片段表达和细胞增殖情况.结果:成功构建TERT△基因片段,测序证明重组慢病毒载体pGC-LV/mTERT△-EGFP构建成功.包装慢病毒颗粒LV-mTERT△-EGFP可以感染神经干细胞和神经元,端粒酶活性测试证明目的蛋白的端粒酶催化活性缺陷,抑制神经干细胞增殖,抑制内源性mTERT功能.结论:慢病毒载体LV-mTERT-EGFP构建成功,可以表达无活性mTERT片段.
其他文献
目的:探讨人胰腺星状细胞的两种新分离方法.方法:通过酶消化-密度梯度离心法进行静止态的人正常胰腺星状细胞的分离,分离获得的细胞在含10％FBS的DMEM/F12继续培养.通过组织块
目的:探讨ETS1/2对非洲爪蛙胚胎胰腺发育的影响。方法:设计并合成特异性抑制ETS1/2表达的反义吗啉代寡核苷酸(morpholino oligonueleitide,MO),通过显微注射的方法将MO转入爪
目的:探讨狼疮鼠(MRL/lpr)骨BMP/Smads信号通路表达情况.方法:分离小鼠股骨制备组织切片,常规苏木素-伊红(HE)染色,观察骨质情况;免疫组化观察骨组织中骨形态发生蛋白-2 (bon
目的:构建miRNA-205过表达载体并研究miRNA-205对猪诱导多能干细胞系建立的影响。方法:对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪内细胞团细胞及猪胎儿成纤维细胞三者之间进
高职学生的学习任务是技能方面的学习,因此对一些学生来说会忽略其他方面的学习;而合唱声乐的训练也是很重要的,声乐训练对于学习音乐的学生是必须掌握的一项训练,而合唱又是
目的:在STO小鼠成纤维细胞中表达猪白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),并尝试使用其作为饲养层培养大鼠诱导多能性干细胞(iPS细胞).方法:通过脂质体转染的技术
近年来,随着高中体育教学在新课改的深入推行下,体育教学也慢慢得到了重视.以往应试教育忽视体育这门学科,而现在体育也作为高中教育的重要组成部分.因此,它的教学质量也成为
目的 :研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在小脑发育早期对小脑外颗粒层的颗粒细胞前体(GCP)细胞增殖迁移的影响。方法:通过石蜡切片免疫荧光观察小脑外颗粒层GCP细胞增殖情况;建
随着教育深入改革,尤其是对初中的生物教学产生了很大影响.以往的生物教学模式已经不能满足现阶段的生物教学需求,因此,必须要探究新的教学模式.案例教学是根据实际的教学内